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目的：研究早产自然分娩、足月自然分娩及足月择期剖宫产产妇外周血单个核细胞TLR4、MD2及CD14mRNA的表达水平,探讨TLR4、MD2和CD14表达与早产及亚临床绒毛膜羊膜炎的关系。方法：选择2008年8月-2009年5月,我院产科住院的早产自然分娩组(28周-36+6周)20例,足月妊娠自然分娩组(37周-41+6周)28例,足月择期剖宫产组(38+5周-41周)10例。收集每位受试对象抗凝的外周血2ml(自然分娩组活跃早期采集标本,剖宫产组术前采集标本),Ficoll密度梯度离心法分离外周血中单个核细胞。应用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测外周血中TLR4、MD2、CD14mRNA的表达,并通过同一产妇胎盘HE染色,观察TLR4、MD2、CD14的表达与亚临床绒毛膜羊膜炎的关系。结果：1.三组产组外周血均可检测到TLR4、MD2、CD14的表达。自然分娩组产妇进入活跃期后外周血TLR4、MD2、CD14mRNA高表达,早产自然分娩组TLR4mRNA(0.41±0.17)、MD2mRNA(0.39±0.20)表达水平明显高于足月自然分娩组TLR4mRNA(0.18±0.85)、MD2mRNA(0.22±0.13)表达水平(p<0.05)。但CD14mRNA在两组均高表达,组间表达无统计学差异,(1.82±0.58 Vs 1.69±0.53)(p=0.42>0.05)。早产及足月自然分娩组TLR4、MD2、CD14mRNA表达均高于足月剖宫产组,早产自然分娩组与足月剖宫产组比较均有统计学差异(p<0.05)；但TLR4、MD2的表达在足月自然分娩组与剖宫产组比较无统计学差异,p>0.05；而CD14表达有统计学差异,p<0.05。2.20例早产自然分娩产妇有14例(70%)为亚绒毛膜羊膜炎患者；28例足月自然分娩产妇有9例(32.14%)为亚绒毛膜羊膜炎患者；10例足月剖宫产产妇有2例(20%)为亚绒毛膜羊膜炎患者。妊娠合并亚临床绒毛膜羊膜炎组较妊娠无亚临床绒毛膜羊膜炎组,外周血中TLR4、MD2、CD14mRNA表达水平高,差异具有统计学意义(p<0.05)。TLR、MD2、CD14mRNA表达水平与亚临床绒毛膜羊膜炎存在正相关性,相关系数r分别为0.635、0.467、0.404,p<0.05。3.相关分析发现,孕妇外周血中TLR4、CD14、MD2mRNA表达水平,两两之间均存在正相关关系。TLR4与MD2、TLR4与CD14、MD2与CD14表达的相关系数(r)分别为0.719、0.525、0.488,p<0.01。结论：1.早产自然分娩产妇,尤其合并亚临床绒毛膜羊膜炎时外周血TLR4、MD2表达最高,提示可能与早产及感染有关。2.外周血中CD14在自然分娩组表达均高于剖宫产组,但在自然分娩两组间无统计学差异,且在合并亚临床绒毛膜羊膜炎时表达增加,提示CD14可能与分娩发动及感染有关。目的：研究TLR4、MD2及CD14在胎盘组织不同部位的分布及表达。探讨其在早产分娩中的意义。方法：采用免疫组化技术检测三组产妇胎盘组织TLR4、MD2、CD14的表达及分布情况,并观察TLR4、MD2、CD14表达与早产及亚临床绒毛膜羊膜炎的关系。结果：1.免疫组化结果表现为：TLR4主要表达于胎盘合体滋养细胞、合体细胞小结、绒毛外滋养细胞及羊膜细胞的胞浆和胞膜,胞核表达阴性；MD2主要表达于胎盘合体滋养细胞、合体细胞小结、绒毛间Hofbauer细胞、绒毛外滋养细胞及羊膜细胞的胞浆、胞膜及胞核,其中胞核表达强阳性；CD14分布较前两者稍有差异,主要表达于胎盘合体滋养细胞及羊膜细胞的胞浆、胞膜,胞核表达阴性；还可表达于血管内皮细胞,但绒毛外滋养细胞表达阴性。2. TLR4、MD2、CD14在胎盘合体滋养细胞及羊膜细胞表达,早产自然分娩组表达强于足月自然分娩组,两两比较均有统计学差异(p<0.05)。两组均表达强于足月剖宫产组。但TLR4蛋白表达在足月自然分娩组和剖宫产组间无统计学差异(p>0.05),其余两两比较均有统计学差异(p<0.05)。3. TLR4、MD2及CD14在羊膜细胞分布具有极性。足月剖宫产组羊膜细胞中TLR4、MD2及CD14主要分布在羊膜细胞母体面,但早产自然分娩组和足月自然分娩组中TLR4、MD2及CD14在羊膜细胞的分布大都极性基本消失,表现为胞浆表达阳性。4.绒毛外滋养细胞表达TLR4、MD2,表达强弱在足月剖宫产组、足月自然分娩组和早产自然分娩组依次增强,组间比较均有统计学差异(p<0.05)。CD14在绒毛外滋养细胞表达阴性。5.TLR4、MD2、CD14在妊娠合并亚临床绒毛膜羊膜炎组表达高于妊娠无亚临床绒毛膜羊膜炎组,差异具有统计学意义(p<0.05)。妊娠合并亚临床绒毛膜羊膜炎组TLR4、MD2及CD14在羊膜细胞的分布大都极性消失。6.胎盘组织的MD2、CD14的表达成正相关：胎盘合体滋养细胞TLR4与TLR4与CD14、MD2与CD14的相关系数(r)分别为0.831、0.831、0.718,p<0.01；羊膜细胞TLR4与MD2、TLR4与CD14、MD2与CD14的相关系数(r)分别为0.699、0.526、0.538,p<0.01；绒毛外滋养细胞TLR4与MD的相关系数r为0.656,p=0.000(绒毛外滋养细胞CD14表达阴性)。7.TLR4在外周血及胎盘合体滋养细胞的表达具有正相关性,相关系数r=0.885,p<0.01;MD2及CD14在外周血及胎盘合体滋养细胞的表达亦具有正相关性,相关系数r分别为0.636,0.512,p<0.01。结论：1.胎盘中合体滋养细胞、羊膜细胞均可检测到TLR4、MD2、CD14的表达。而绒毛外滋养细胞只有TLR4、MD2表达,CD14表达阴性。2.胎盘中TLR4、MD2及CD14的表达及分布与早产和感染有关,且羊膜细胞的TLR4、MD2及CD14分布具有极性,分娩发动和感染的情况下极性消失。3.外周血及胎盘合体滋养细胞的TLR4、MD2、CD14表达具有正相关性,提示外周血的表达情况能反映胎盘部位的表达程度。目的：通过体外滋养细胞培养,利用中和性TLR4抗体阻断TLR4技术,研究TLR4.MD2及CD14在LPS刺激反应中对IL-6、TNF-α表达水平的影响。方法：1.分离培养人足月胎盘的绒毛膜滋养细胞,用不同浓度纯化LPS刺激培养滋养细胞不同时间,通过检验培养细胞TLR4mRNA (RT-PCR)和培养上清液中IL-6、TNF-α水平(ELISA法),得到刺激最大炎症反应的最有效LPS浓度(10ng/ml)和最佳时间(12h)。2.将TLR4抗体(H-80)加入到胎盘培养液中,预处理后,再加入LPS(最有效浓度10 ng/ml),继续培养到反应最佳时间(12h)。利用RT-PCR和Western blot技术分别检验刺激后TLR4、MD2、CD14的mRNA、蛋白表达的差异,并用ELISA法检测培养上清液中促炎因子的变化情况以研究TLR4、MD2、CD14在LPS诱导炎症反应中的作用及生物学功能。结果：1.原代培养的绒毛膜滋养细胞表达TLR4、MD2和CD14, LPS孵育刺激可使其表达明显增强,伴随细胞培养上清液中促炎因子IL-6、TNF-α增加。2.LPS刺激后,TLR4mRNA和培养液上清液中促炎因子IL-6、TNF-α随作用时间延长表达增加,12h达到高峰,继续延长时间反而出现表达下降。3.1 ng/ml浓度的LPS即可引起TLR4mRNA和促炎因子表达显著增加,此后随着LPS浓度的增高,表达继续增加,当LPS浓度达到10ng/ml时,继续增加LPS浓度,TLR4 mRNA和上清液中IL-6、TNF-α表达未见增加,反而下降。4. TLR4、MD2、CD14mRNA和蛋白表达在LPS组、阻断组和对照组变化一致,表现为LPS组细胞TLR4、MD2和CD14 mRNA和蛋白表达最高,与阻断组、对照组相比较,其差异均有统计学意义(p<0.05)。TLR4、MD2和CD14 mRNA和蛋白表达在阻断组细胞表达最弱,与LPS组及对照组细胞相比,差异有统计学意义(p<0.01)；同时伴随着培养上清液中IL-6、TNF-α相应的表达变化。结论：1. TLR4、MD2和CD14在人绒毛膜滋养细胞中表达。在LPS刺激下表达增加,引起促炎因子IL-6、TNF-α增加,TLR4抗体能阻断这种作用。2.LPS刺激体外培养的滋养细胞存在免疫耐受现象。3. LPS-TLR4-MD2-CD14-促炎因子这一信号通路参与滋养细胞的炎症反应,推测其可能参与早产分娩发动。