论文部分内容阅读
蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPs)能广泛影响细胞增殖、分化、迁移、凋亡及免疫应答等过程。许多疾病诸如糖尿病、癌症、肥胖、类风湿和免疫功能紊乱等都与PTPs的异常表达有关。有效抑制PTPs的活性能够提高细胞磷酸化水平,调节细胞信号转导。T细胞蛋白酪氨酸磷酸酶(TCPTP)是一种胞内非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶。由于它在控制炎症和调控肿瘤方面的重要作用,近年来,TCPTP抑制剂的研究受到人们的广泛关注。研究表明铜配合物具有很强的PTP抑制活性,因此以TCPTP为靶点研究铜配合物的抗癌活性及机理为开发新型铜配合物抗癌药物提供理论依据。基于双核铜配合物[Cu2(μ-IDA)(phen)3(NO3)]NO3·4H2O(phen=1,10-phenanthro-line, H2IDA=iminodiacetic acid)(1)能够有效而且选择性抑制体外重组TCPTP的实验结果,本文进一步研究了该配合物对四种肿瘤细胞内TCPTP的抑制活性和选择性及其对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响,初步建立裸鼠异种移植瘤模型,并且研究了活体水平上该配合物的抗肿瘤活性及对组织内TCPTP的抑制活性。主要工作和研究结果如下1、运用MTT染色法检测肿瘤细胞活力,研究了配合物1对人乳腺癌细胞(MCF7)、宫颈癌细胞(HeLa)、肝癌细胞(HepG2)、脑胶质瘤细胞(U251)的抑制增殖情况。结果表明:配合物1对四种肿瘤细胞均有抑制增殖作用并且呈现时间和浓度依赖关系,但是对不同细胞抑制作用的强弱程度不同。配合物1对HeLa细胞的抑制增殖效果最强,对U251细胞的抑制增殖效果最弱。铜离子对四种肿瘤细胞的抑制增殖效果不明显,配体对四种肿瘤细胞有抑制增殖作用但是相同条件下抑制增殖效果明显弱于配合物。2、运用流式细胞术和Annexin V-PI双染法研究了配合物1对四种肿瘤细胞的诱导凋亡能力。结果表明:配合物1在作用12h后对四种肿瘤细胞均有诱导凋亡效果且呈现浓度依赖关系。配合物1对不同肿瘤细胞的诱导凋亡能力具有选择性。浓度为10μM的配合物1作用12h后,MCF7细胞的晚期凋亡比例高达89.5%,而U251的晚期凋亡比例为49.5%。相同浓度和作用时间下铜离子和配体对四种肿瘤细胞基本没有诱导凋亡效果。3、运用蛋白免疫印迹法检测配合物1对四种肿瘤细胞内PTPs的抑制活性及选择性。结果表明:配合物1能选择性抑制肿瘤细胞内TCPTP的活性且对不同种细胞有选择性。在配合物1浓度达到10μM作用7h后,MCF7细胞内TCPTP底物的磷酸化水平明显升高,PTPIB底物的磷酸化水平基本没有变化。而U251细胞则在配合物1的浓度达到5μM时TCPTP底物的磷酸化水平明显升高。此外配合物1作用7h后肿瘤细胞内EGFR的表达量也升高,泛素的表达量基本没有变化。说明配合物1可能通过选择性抑制细胞内的TCPTP进而影响细胞新陈代谢,除作用于TCPTP外配合物还可能作用于EGFR上游靶标影响EGFR在细胞中的表达。配合物1不通过抑制蛋白酶体抑制细胞增殖。4、初步构建裸鼠MCF7细胞异种移植瘤模型,研究了配合物1的抗肿瘤活性和其对模型鼠各组织内TCPTP的抑制活性。初步判断在活体水平上,配合物1有一定的抗肿瘤效果,能抑制瘤体内TCPTP的活性影响EGFR的表达量。