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目的:研究基质细胞衍生因子-1(SDF-1)和血管内皮生长因子(VEGF)在糖尿病视网膜病变中的表达情况,探讨SDF-1拮抗剂对糖尿病大鼠视网膜新生血管的抑制作用。
方法:选择健康成年SD大鼠36只,随机分成正常对照组、糖尿病组、拮抗剂组。制作SD大鼠糖尿病模型,以65mg/kg的剂量行左下腹腔注射10%链尿佐菌素溶液(STZ),并于1周后检测血糖,将餐后血糖浓度持续稳定大于16.7mmol/L的大鼠定为糖尿病模型。拮抗剂处理组为糖尿病大鼠玻璃体腔及球后注射AMD3100。各组按照标本采取时间分为1月组、3月组、5月组。透射电镜观察各组大鼠视网膜微血管超微结构的变化,免疫组织化学方法测定VEGF和SDF-1的表达,HE染色观察各组大鼠视网膜形态学改变。所得数据用SPSS18.0软件进行分析。
结果:
1.血管透射电镜观察:(1)形态学差异:正常对照组未见异常改变,DM1开始出现异常改变,DM5最明显,表现为内皮细胞肿胀,向管腔内指状突起,基底膜变性、增厚,异染色质浓集居边,周细胞数目减少,线粒体肿胀变性。各拮抗剂组虽然也出现上述改变,但与相应时间点上的DM组相比明显改善。(2)基底膜厚度改变:糖尿病组视网膜毛细血管平均基底膜厚度值与相应时间点的正常组及拮抗剂组相比均增加,差异有统计学意义;其中CON5大鼠视网膜毛细血管平均基底膜厚度为(0.043±0.082)μm,DM5为(0.257±0.203)μm,AMD5为(0.145±0.076)μm,DM5组平均基底膜厚度值与CON5组平均基底膜厚度值相比升高,差异有统计学意义,DM5组平均基底膜厚度与AMD5组平均基底膜厚度相比升高,差异有统计学意义。且糖尿病组大鼠视网膜毛细血管基底膜厚度值随着病程的延长逐渐增加,DM1、DM3、DM5三者比较均有统计学意义。
2.免疫组化:(1)形态学观察:每组视网膜神经上皮均可见VEGF和SDF-1表达,主要位于内层视网膜、内颗粒层、神经节细胞层。VEGF和SDF-1在拮抗剂组视网膜上的表达较对应时间点糖尿病组视网膜上的表达弱,更接近于对应时间点的正常对照组。(2)计算积累光密度(IOD):各组糖尿病组VEGF和SDF-1阳性表达的积累光密度的值与相应时间点的拮抗剂组相比,相对升高,糖尿病组VEGF和SDF-1阳性表达的积累光密度的值与相应时间点的正常组相比,相对升高,各组比较均有统计学意义。其中,5月组SDF-1阳性表达的积累光密度的值变化显著,5月的正常对照组、糖尿病组、拮抗剂处理组的积累光密度值分别为(1.975±0.312)、(4.376±0.283)、(3.105±0.337),5月糖尿病组积累光密度值与5月拮抗剂组相比增加,比较有统计学意义,5月糖尿病组积累光密度值与5月正常对照组相比增加,比较有统计学意义。且随着病程的延长糖尿病组中VEGF和SDF-1阳性表达的积累光密度值也增加,DM1、DM3、DM5三者比较均有统计学意义。
3.HE染色显示:(1)形态学观察:拮抗剂组的石蜡切片HE染色表现与对应时间点糖尿病组相比差异明显,更接近于正常对照组。(2)突破内界膜的细胞核计数:正常对照组极少见突出视网膜内界膜的内皮细胞核,CON1、CON3、CON5组的突出视网膜内界膜的内皮细胞核分别为(0.777±0.666)个、(1.222±1.092)个、(1.000±0.866)个,三组相比无统计学差异,而糖尿病组随着病程的延长突出视网膜内界膜的数目也逐渐增多,DM1、DM3、DM5三者比较均有统计学意义。糖尿病组与相应时间点的拮抗剂组相比,突破视网膜内界膜的内皮细胞数相对增多,比较有统计学意义,糖尿病组与相应时间点的正常组突破视网膜内界膜的内皮细胞数相对增多,比较有统计学意义。
结论:
1.糖尿病大鼠随糖尿病病程延长VEGF,SDF-1在视网膜表达水平逐步增高、视网膜毛细血管异常增生和毛细血管管壁的异常改变加重。
2.AMD3100能抑制STZ诱导的糖尿病大鼠视网膜病变的SDF-1的表达,减轻视网膜毛细血管异常增生和毛细血管管壁的异常改变。