论文部分内容阅读
目的通过体外培养的人视网膜Müller细胞,研究贝伐单抗（Bevacizumab）对氯化钴（CoCl2）诱导的缺氧人视网膜Müller细胞上水通道蛋白4（Aquaporin-4）表达的影响,探讨贝伐单抗在治疗视网膜水肿中的相关作用机制。方法采用酶消化法来培养人视网膜Müller细胞,通过电镜、细胞免疫荧光染色和形态观察进行Müller细胞的鉴定。通过半定量RT-PCR检测500μmol/L氯化钴（CoCl2）分别作用0h,6h,12h,24h及浓度分别为0μmol/L,100μmol /L,300μmol /L,500μmol/L,700μmol/L的CoCl2作用24h后,Müller细胞上AQP4mRNA和VEGFmRNA的表达,构建CoCl2诱导的Müller细胞缺氧模型。用半定量RT-PCR检测50ng/ml外源性血管内皮生长因子（VEGF）分别作用0h, 12h, 24h及浓度分别为0 ng/ml,25ng/ml,50ng/ml,75ng/ml的VEGF作用24h后,Müller细胞上AQP4mRNA的表达,了解VEGF对人视网膜Müller细胞上AQP4的影响。用半定量RT-PCR检测200μg/ml Avastin干预下CoCl2诱导的缺氧人视网膜Müller细胞上AQP4mRNA的表达水平。结果经过电镜、细胞免疫荧光染色和细胞形态的鉴定,本次实验成功培养出人的视网膜Müller细胞。RT-PCR结果显示: CoCl2诱导的Müller细胞缺氧可导致AQP4mRNA和VEGFmRNA的表达上调。随着缺氧时间的延长,VEGFmRNA和AQP4mRNA表达逐渐增强,二者的变化趋势呈正相关（r=0.952, p<0.05）。随着缺氧程度的加重,二者的增加趋势亦呈正相关（r=0.954,p<0.05）。在VEGF作用下, Müller细胞上AQP4mRNA的表达上调（p<0.01）,并随着VEGF作用的时间和浓度的增加呈上升趋势。CoCl2诱导的Müller细胞缺氧,在贝伐单抗干预下,Müller细胞上AQP4mRNA的表达降低,表达下降水平和未干预组相比差异有显著意义（p<0.01）。结论体外正常生长状态下的人视网膜Müller细胞表达AQP4及VEGF,CoCl2诱导的缺氧可以增加Müller细胞上AQP4和VEGF的表达。VEGF可以上调Müller细胞AQP4的表达。贝伐单抗通过抑制VEGF,能够降低Müller细胞缺氧时AQP4的表达水平。