目的：构建人Nanog基因重组腺病毒载体(Ad—Nanog),转染人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hucMSCs),检测nanog基因在hucMSCs中的表达,研究Nanog基因修饰对hucMSCs的生物学特性影响,希望能促进hucMSCs维持自我更新能力及多向分化潜能,为基因修饰hucMSCs的后继研究提供实验基础。　　 方法：设计含有KpnⅠ及XhoⅠ酶切位点的引物,PCR扩增Nanog,将扩增产物亚克隆到pAdTrack-CMV穿梭质粒上,经双酶切和基因测序鉴定,重组穿梭质粒经PineⅠ线性化后,在含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183中同源重组,筛选获得Ad-Nanog重组腺病毒质粒,经PacⅠ酶切线性化,脂质体转染293A细胞,包装和扩增病毒,并感染hucMSCs。通过免疫组织化学,Western blot检测Nanog在hucMSCs中的表达及亚细胞定位；MTT、平板克隆实验检测Nanog修饰对hucMSCs增殖和克隆形成能力的作用；提取细胞的总RNA,并逆转录成cDNA,检测干细胞相关基因的表达情况；裸鼠致瘤实验评价Nanog修饰hucMSCs的生物安全性。　　 结果：重组腺病毒质粒经PCR和Xho1及Kpn1酶切鉴定正确,测序结果和设计片段的序列一致。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在感染的hucMSCs中高效表达。Nanog基因修饰促进hucMSCs的增殖,克隆形成,成骨分化。　　 结论：成功构建了Nanog腺病毒表达载体,能高效转染hucMSCs,Nanog基因修饰改善了hucMSCs部分干细胞特性,为转基因修饰hucMSCs的研究奠定了基础。