【摘 要】
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目的:研究消瘿散石方通过GINS2调控MAPK/ERK信号通路影响甲状腺癌发生发展的机制。方法:（1）采用原位移植的方法构建裸鼠甲状腺癌模型。（2）设计合成调控GINS2表达的sh RNA和质粒并转染细胞,构建干扰/过表达的甲状腺癌细胞系。（3）MTT法和细胞成像分析检测细胞增殖活性。（4）流式细胞分析技术检测细胞凋亡和细胞周期变化。（5）RT-PCR和Western Blot检测靶基因和蛋白表达
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目的:研究消瘿散石方通过GINS2调控MAPK/ERK信号通路影响甲状腺癌发生发展的机制。方法:（1）采用原位移植的方法构建裸鼠甲状腺癌模型。（2）设计合成调控GINS2表达的sh RNA和质粒并转染细胞,构建干扰/过表达的甲状腺癌细胞系。（3）MTT法和细胞成像分析检测细胞增殖活性。（4）流式细胞分析技术检测细胞凋亡和细胞周期变化。（5）RT-PCR和Western Blot检测靶基因和蛋白表达、MAPK/ERK信号通路关键蛋白水平。（6）采用生物信息学方法分析含药血清干预甲状腺癌细胞的靶基因及信号通路。结果:（1）消瘿散石方可抑制肿瘤组织增长,观察37天后,肿瘤组织体积和肿瘤z重量均显著低于对照组,差异具有显著统计学意义（P＜0.01）。（2）消瘿散石方作用于甲状腺癌细胞后,细胞增殖能力显著降低、凋亡率增加,与对照组相比,差异均具有统计学意义（P＜0.05）.（3）生物信息学分析结果显示GINS2为消瘿散石方作用甲状腺癌的主要靶点之一,实验组GINS2 mRNA和蛋白表达水平显著低于对照组,差异具有显著统计学意义（P＜0.01）。（4）GINS2干扰后,ERK、p-ERK表达显著降低;GINS2过表达后,消瘿散石方对ERK、p-ERK的抑制作用被抵消,差异具有显著统计学意义（P＜0.01）。（5）GINS2干扰后,细胞增殖能力显著降低;GINS2过表达后,消瘿散石方对细胞增殖能力的抑制作用被抵消（P＜0.001）。（6）GINS2干扰后,细胞凋亡率显著增加;而GINS2过表达后,消瘿散石方对细胞凋亡能力的诱导作用被抵消（P＜0.001）。（7）肿瘤组织GINS2 mRNA的表达量显著高于瘤旁组织（P＜0.05）。GINS2sh RNA转染甲状腺癌细胞后,GINS2 mRNA和蛋白表达水平下降,细胞增殖被抑制;GINS2质粒感染细胞后,GINS2 mRNA和蛋白表达水平上升,细胞增殖活性增强。（8）MAPK/ERK信号通路在消瘿散石方抑制甲状腺癌中发挥着重要作用,GINS2干扰后,其关键蛋白ERK、RAS、CDK6蛋白均显著降低,与对照组比较,差异具有显著统计学意义（P＜0.01）。（9）采用GINS2消减的甲状腺细胞接种裸鼠后,可抑制瘤体形成和增长,瘤组织体积和肿瘤显著低于对照组,差异具有显著统计学意义（P＜0.01）。结论:本研究发现消瘿散石方通过GINS2调控MAPK/ERK信号通路影响甲状腺癌细胞增殖并促进其凋亡。本研究为中西医结合治疗甲状腺癌提供了的实验依据,GINS2可为甲状腺癌揭示一个潜在的治疗或预后的生物标志,以及一个新的治疗靶点。
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