近年来，包括我国在内的东亚地区多次爆发由肠道病毒感染导致的手足口病(hand-foot and mout disease，HFMD)疫情。肠道病毒71型(EV71)是HFMD主要病原体之一，其重症患者比例以及病死率均明显高于其他肠道病毒，具有非常重要的公共卫生意义。然而，目前尚无有效的针对性治疗方法和预防疫苗，同时对于EV71的感染、致病机制等仍有许多基础问题有待阐明。因此，需要进一步建立和完善针对EV71的研究技术和方法，这对支持EV71的防控研究是十分必要的。本研究目的是以EV71感染性克隆为基础建立一种新型的带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的重组EV71病毒，并鉴定该重组病毒的特性及应用潜力，同时尝试建立一种基于EGFP标记病毒的EV71中和抗体快速检测方法。本研究结果可为EV71的防治研究提供重要的基础和工具。　　 EV71病毒基因组大小约为7.5kb，仅有一个开发阅读框。本研究应用重组PCR技术在病毒ORF区与5UTR区之间插入一个EGFP基因及一个编码-AITTL多肽的寡核苷酸序列。-AITTL-是能被病毒自身的特异性2A蛋白酶识别的多肽，经过2A蛋白酶的剪切，能将EGFP与病毒蛋白解离。因此，增强型绿色荧光蛋白嵌合的EV71病毒既能像普通EV71一样感染细胞并复制，具有相同的抗原性，同时又能够表达具有示踪作用的EGFP。通过T7转录系统，该嵌合感染性克隆拯救得到的病毒(EV71-EGFP)，能够进行稳定的传代。通过检测病毒感染后表达的EGFP，可用于快速检测和追踪EV71对细胞的感染情况。本研究应用EV71-EGFP感染多种不同组织来源的细胞系，通过分析感染细胞中的EGFP表达情况评价了不同细胞对EV71病毒的易感性。EGFP嵌合EV71重组病毒可为EV71的受体研究和抗病毒药物研究提供参考和便利。　　 同时，本研究应用EV71-EGFP初步建立了一种新型的快速、高通量的EV71中和抗体检测方法。该方法是应用本研究构建的带有绿色荧光蛋白基因标记的EV71病毒感染RD细胞，18小时后利用Beckman公司的paradigm analysis系统测定样品孔中的EGFP荧光强度，进而计算出待测样品的中和抗体滴度。此方法可利用自动化的仪器设备进行快速检测，客观性好，避免了传统方法的主观误差，有利于进行快速高通量检测。本研究进一步对该方法进行优化和性能评价，结果显示该方法与传统的CPE中和方法以及的Elispot中和方法具有良好的相关性，三种方法的检测结果平行比较体现出较好的一致性。同时，本研究应用该方法检测了部分EV71单抗和多抗的中和抗体效价，结果显示该方法具有较好的应用前景，可为EV71中和抗体评价和预防疫苗研制提供重要基础。