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目的:1.细胞实验:基于ERK1/2信号通路探讨肾脑复元汤对OGD干预后体外培养的胎鼠NSCs增殖、分化的影响及其作用机制;2.动物实验:基于ERK1/2信号通路探讨肾脑复元汤对脑缺血损伤后内源性NSCs增殖及神经元向分化的影响及其作用机制。方法:1.细胞实验:取孕14天胎鼠大脑皮层培养NSCs,OGD干预模拟脑缺血环境,增殖实验中采用含10uM BrdU增殖培养基干预24h,分化实验采用分化培养基干预7天,各分为四组:正常组、模型组、中药组及抑制剂组,采用CCK-8法检测细胞增殖活力,免疫荧光检测BrdU、MAP-2、GFAP阳性细胞计数,Western blot检测MAP-2、GFAP、p-ERK1/2蛋白表达。2.动物实验:成年SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组及抑制剂组,MCAO术模拟缺血性中风,神经功能缺损评分、脑梗死体积评定脑组织修复情况,免疫组化检测海马及侧脑室下区Nestin及MAP-2表达,Western blot检测p-ERK1/2蛋白表达。结果:1.细胞实验:(1)CCK-8结果显示:中药组在OGD干预后24h细胞增殖活力均明显高于模型组及抑制剂组,组间比较有显著统计学差异(P<0.01)。(2)NSCs增殖实验:中药组BrdU免疫荧光阳性细胞比率高于模型组及抑制剂组,组间比较有统计学差异(P<0.05或P<0.01)。(3)增殖实验Western bolt检测显示:中药组p-ERK1/2蛋白表达明显高于模型组及抑制剂组,组间比较具有显著统计学差异(P<0.01)。(4)NSCs分化实验:中药组MAP-2免疫荧光标记阳性细胞比例明显高于模型组及抑制剂组,组间比较有显著统计学差异(P<0.01);中药组GFAP免疫荧光标记阳性细胞比例显著低于模型组及抑制剂组,组间比较具有显著统计学差异(P<0.01)。(5)分化实验Western bolt检测显示:中药组MAP-2、p-ERK1/2蛋白表达明显高于模型组及抑制剂组,组间比较具有显著统计学差异(P<0.01);中药组GFAP蛋白表达明显低于模型组及抑制剂组,组间比较具有显著统计学差异(P<0.01)。2.动物实验:(1)神经功能缺损评分:MCAO术后3天、7天、14天,中药组神经功能缺损评分较同时间点模型组及抑制剂组下降,组间比较有统计学差异(P<0.05或P<0.01)。(2)脑梗死体积:中药组术后3天、7天、14天脑梗死体积均小于同时间点模型组及抑制剂组,组间比较有统计学差异(P<0.05或P<0.01)。(3)内源性NSCs增殖:中药组各时间点海马区及侧脑室下区Nestin阳性细胞计数明显高于模型组及抑制剂组,组间比较具有显著统计学差异(P<0.01)。(4)神经元向分化:中药组各时间点海马区及侧脑室下区MAP-2阳性细胞计数明显高于模型组及抑制剂组,组间比较具有显著统计学差异(P<0.01)。(5)p-ERK1/2蛋白表达:中药组术后3天、7天、14天p-ERK1/2蛋白表达均高于模型组及抑制剂组,组间比较具有显著统计学差异(P<0.01)。结论:1、肾脑复元汤通过调控ERK1/2信号通路,促进体外培养胎鼠NSCs增殖及神经元向分化,抑制星形胶质细胞向分化。2、肾脑复元汤通过调控ERK1/2信号通路,促进内源性NSCs增殖及神经元向分化,起到脑保护作用。