论文部分内容阅读
let-7家族是最早被发现的在物种间高度保守的广泛性表达miRNA，在肿瘤细胞的增殖、分化、脂肪生成及药物敏感性等方面发挥重要调控作用。前期我们采用Solexa高通量测序技术构建了固始鸡1日龄和36周龄两个发育阶段下丘脑的miRNA表达谱，分析发现let-7家族的8个成员在鸡下丘脑发育过程均呈高丰度差异性表达，尤其是let-7a，这表明let-7家族的miRNA在鸡下丘脑发育过程可能发挥重要调节作用。但目前有关鸡let-7a功能的研究尚未见报道。 本研究采用实时定量PCR检测了let-7a在固始鸡14日龄胚胎、17日龄胚胎、1日龄雏鸡和36周龄成年鸡的13种不同组织中的表达情况;利用两种算法预测了let-7a的靶基因，并对共有靶基因进行了GO富集分析和KEGG通路分析;根据生物信息学分析结果，利用实验室固始鸡-安卡鸡资源群体素材，探讨了let-7a靶基因脂联素受体2 Adiponectin receptor2(ADIPOR2)的遗传效应，分析了该基因的时序表达特征及其SNP与鸡生产性状间的关联性，主要结果如下: 1.let-7a在所检测的组织中呈广泛性表达，其在下丘脑中的表达趋势与高通量测序结果一致;但组织间的表达量却存在较大的差异。14日胚龄和17日胚龄时，在脑组织和内脏组织中表达量均较高;1日龄时，let-7a在下丘脑、小脑、胸肌、肌胃和肾脏等组织中高丰度表达，在肺中低丰度表达，其它组织中适度表达;36周龄时，let-7a在各组织中的表达量均相对较低。 2.对let-7a的107个预测的靶基因进行了GO富集分析和KEGG通路分析，结果显示靶基因主要在生物学过程调节相关的生物学过程中富集，尤其是与矿物质和磷代谢相关的调节过程;且在粘着斑、细胞外基质受体互作、MAPK信号通路等3个通路中显著富集(P＜0.01)。 3.let-7a预测的靶基因ADIPOR2在鸡不同生长阶段不同组织中广泛性表达。随着生长发育，ADIPOR2在大脑和肌胃两种组织中的表达水平与let-7a的表达水平变化趋势是相反的;在肺中，两者表达水平变化趋势一致;但在肾脏和小脑等其它10种被检测的组织中，两者表达水平的变化趋势没有呈现明显的对应关系。这些结果表明，let-7a和ADIPOR2基因在大脑和肌胃发育过程存在潜在的互作关系。 4.对let-7a潜在靶基因ADIPOR2的SNP关联分析结果表明，g.34490C＞T突变与肝脏重和血液球蛋白显著相关（P＜0.05），g.35363T＞C与6、10和12周龄体重显著相关(P＜0.05)，这两个多态都没有明显影响与脂肪相关的性状。g.34490C＞T位点对相关性状具有显著的加性效应(P＜0.05)，g.35363T＞C位点对显著相关的屠体性状具有显著的显性效应(P＜0.05)。