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目的:⑴研制灯黄颗粒(Denghuang Granule,DHG),为糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)的防治提供一种安全、有效的纯中药制剂。⑵以链脲佐菌素(Streptozotocin.STZ)法建立糖尿病大鼠模型,观察DHG对其肾脏的保护作用,并探讨可能的机制。
方法:①以提取物中灯盏花乙素(Scutellarin,Scu)和大黄酸(Rhein,Rh)含量为指标,正交试验优选DHG的超声提取工艺。以制湿粒难易程度为指标,筛选DHG制备中填充剂的种类、用量,以及润湿剂的浓度,确立DHG的成型工艺。以HPLC法测定其主要成分Scu和Rh的含量。②将200-250g正常雄性Wistar大鼠一次性腹腔注射STZ诱导成糖尿病后,随机分为5组,分别为糖尿病对照组(DM,正常饮水)、卡托普利治疗组(Cap,10mg/kg)、DHG低剂量组(LD,30mg/kg)、DHG中剂量组(MD,60mg/kg)及DHG高剂量组(HD,120mg/kg),每组10只,另取10只正常大鼠作为正常对照组。各治疗组按以上剂量每日上午灌胃给药。给药12w后处死大鼠,取血、尿和肾脏标本,测定血糖、血尿素氮(BUN)、甘油三醇(TG)、胆固醇(TC),尿肌酐(Cr)、血肌酐(Scr)并计算内生肌酐清除率(Ccr),24h尿白蛋白排泄率(UAER)、肾指数及肾组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性;光学显微镜下观察各组肾脏组织病理学改变并经图像分析测定平均肾小球面积(MGPA)和体积(MPV)。
结果:⑴DHG最佳提取工艺为:按处方取药材粗粉,加15倍药材体积75%乙醇溶液,水浴下,400W功率,每超声10秒,间歇10秒方式超声15min(净超声时间),200目滤布预滤过,滤纸滤过,残渣同法再提取1次,合并滤液,减压浓缩、65℃减压干燥,粉碎,过80目筛,得干浸膏粉。⑵DHG最佳成型工艺为:将干浸膏粉与可溶性淀粉按1:2比例混合均匀,喷溶解有5‰(按干浸膏粉与可溶性淀粉合计质量)甜菊糖的70%乙醇溶液适量,制成软材,挤压过14目筛,60℃干燥1h,再过14目筛,60℃干燥4h,整粒,干颗粒称重,即得。⑶12w后,与正常对照组比较,糖尿病组大鼠血糖、BUN、TG、TC、Cr、Scr、Ccr、UAER、肾指数、MGPA及MPV明显升高(p<0.01),体重和肾组织SOD活性明显降低(p<0.01)。与糖尿病组比较,在上述除血糖和体重外其余指标中,DHG高对其余11个指标均可显著改善病理变化;中剂量组除对TC改变无显著性差异外,对其余10个指标均可显著改善病理变化;而低剂量组仅对TG、UAER、SOD、肾指数及MPV等5个指标有改善作用,卡托普利组对除TG、TC外的指标有改善作用。
结论:①以超声波提取DHG的工艺简便可行,成品中有效成分含量理想。②DHG成型工艺成熟,成品中Scu和Rh含量测定方法简便,可靠。③糖尿病大鼠12w时肾脏出现明显的结构和功能改变。④DHG对DN有较好的保护作用,该保护作用呈剂量依赖性,以高剂量组的疗效最佳。机制可能与所含主要成分灯盏花乙素和大黄酸两者能提高组织的抗氧化能力,纠正脂质代谢紊乱及抑制TGF-β1的过度表达有关。因而DHG在DN各期发挥着多靶点,多层次的治疗作用,对早期DN患者起到预防作用,对中晚期患者的治疗能起到阻止或缓解DN发生发展。