论文部分内容阅读
目的:动物原奶及各种加工乳制品含有丰富的营养物质,千百年来成为人类喜爱的营养食品,同时也为不同的外源微生物提供了理想的栖息生境,形成了复杂多样的微生物组(microbiota),原奶中的微生物不仅对加工乳品的品质起着重要作用,而且与消费人群的健康密切相关。原乳中的野生型乳酸菌更多是来自于养殖动物栖息环境中的牧草、饲料以及排泄物,相对于已经开发的用于乳品发酵的商品化菌株,其生理特性更加复杂、多样,对乳品发酵过程中特征风味的形成尤为关键。方法:本研宄从我国新疆伊犁地区2个县4个采样点的牧民家庭釆集到原牛奶,利用MRS、M17和肠球培养基从原牛乳中筛选出疑似乳杆菌。采用传统生理生化、属间引物扩增、repetitive genomic fingerprinting(rep-PCR)指纹图谱和16S r RNA基因序列分析相结合的方法研究原牛乳内乳酸菌的遗传多样性。结论:1.新疆伊犁地区原牛乳中乳酸菌活菌数为7.5-8.2×105 CFU ml-1。利用MRS、M17和肠球三种不同培养基从新疆伊犁地区原牛乳中分离筛选出疑似乳酸菌69株。从MRS琼脂培养基纯化结果看出,有52株的菌落形态为白色,为淡黄色的菌株有4株,灰白色的则有7株,剩余6株为乳白色;大部分菌株(62株)的菌落体积较小,大约在1 mm以下,剩余7株菌的大约在1~2 mm。2.利用Lactococcus、Enterococcus和Lactobacillus三个属间引物进行PCR扩增,条带结果显示:13株菌属于Lactococcus,PCR产物约700bp;20株归属于Enterococcus,PCR产物结果为112bp;革兰氏染色呈杆状的用Lactobacillus spp.引物扩增,目的条带在250bp左右,因此将7株归类到Lactobacillus。3.釆用属间PCR、rep-PCR指纹图谱和16S r RNA基因序列分析法对69株分离株鉴定到种水平。16S r RNA基因序列比对结果显示测序菌株与数据库已知菌株的相似度均大于98%。所有菌株分属于6个属的10个种及亚种,分别为:Lactococcus(19%)、Lactobacillus(10.1%)、Leuconostoc(27.5%)、Pediococcus(7.2%)、Streptococcus(7.2%)和Enterococcus(29%)。Enterococcus faecium(20株)占分离株28.9%,是新疆伊犁地区原牛乳中的优势种。其次为Leuconostoc lactis和Lactococcus lactis,分别占总分离株的20.2%和18.8%。此外,还有归属于7个菌种的数量较少的菌株,分别为Streptococcus equinus、Pediococcus pentosaceus、Lactobacillus pentosus、Lactobacillus reuteri、Leuconostoc garlicum、Leuconostoc citreum和Leuconostoc mesenteroides。各样品间乳酸菌的分布差异较大,其中ZS19号共分离出14株乳酸菌,包括1个Streptococcus、5个Enterococcus、2个Lactococcus、1个Lactobacillus和5个Leuconostoc。ZS22号分离出四个属的乳酸菌,分别是:Streptococcus(3)、Enterococcus(1)、Lactococcus(3)和Lactobacillus(1)。TKS57号的乳酸菌多样性最为丰富,共有5个属(Streptococcus、Enterococcus、Lactococcus、Pediococcus和Leuconostoc)。ZS25号样品包含4个属,Lactobacillus为此样品优势菌群,而ZS30号样品优势属为Leuconostoc(8)。除了ZS26号样品只包含Enterococcus(9)外,大部分样品中乳酸菌的种类较多。值得注意的是Enterococcus和Lactococcus在5个样品中均检测到。35株经过16S r RNA基因测序的结果已上传至Gen Bank数据库,序列号为KX583568~KX583575、KX583577~KX583580。此结果证明新疆伊犁地区原牛乳中的乳酸菌资源丰富、种类繁多,具有较大的开发价值。