随着人们膳食结构的不断变化及对健康的日益关注,牛肉品质受到了前所未有的重视,优质、高档牛肉供不应求。生肌家族控制着整个肌肉的发育过程,从前体肌细胞的定型、增殖以及肌纤维的形成,直到个体出生后的成熟和功能的完善,都有生肌调节因子的参与,直接影响着动物的产肉能力与肌肉品质。Myf6是生肌家族中的一员,通过深入研究myf6基因对肌肉发育的调控机制,实现对myf6基因的调控,就能够改变肌肉形成过程中肌纤维的性状,从而提高牛肉品质。本实验应用PCR方法扩增myf6基因片段,在质粒pIRES2-EGFP的多克隆位点插入myf6基因构建真核表达载体pIRES2-EGFP-myf6。脂质体技术转染鲁西黄牛成纤维细胞和成肌细胞,通过G418筛选出稳定转染的细胞株。利用western blot、Real-time PCR技术检测细胞转染前后myf6基因、肌肉肌酸激酶基因和肌球蛋白轻链基因的表达量变化。本实验初步建立了脂质体法转染myf6转基因技术,确定了G418对成纤维细胞的最小致死浓度为400μg/ml,对成肌细胞的最小致死浓度为600μg/ml,两种细胞筛选均获得了稳定转染的细胞株。转染后的成纤维细胞和成肌细胞中myf6蛋白和mRNA的表达量提高(P<0.01),肌肉肌酸激酶基因mRNA表达量升高(P<0.01),肌球蛋白轻链基因的mRNA表达量也提高(P<0.01)。细胞形态观察显示转染后的成纤维细胞没有形态变化,未融合为肌管。转染后的成肌细胞融合为肌管。表明构建的真核表达载体pIRES2-EGFP-myf6能在成纤维细胞和成肌细胞中高效表达,并且myf6基因促进了成肌细胞向肌肉细胞分化。本研究旨在通过基因重组技术构建真核表达载体,使myf6基因在鲁西黄牛成纤维细胞和成肌细胞中表达,建立myf6基因转染细胞的技术基础。获得了myf6基因对两种细胞的分化影响的数据。本研究得到的稳定转染myf6基因的细胞株为下一步进行转myf6基因肉牛体细胞克隆提供了重要的实验材料。