【摘 要】
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目的:探讨乳酸预处理通过调节自噬减轻ARPE-19细胞以及视网膜氧化应激损伤的保护机制方法:1、CCK-8检测法检测H2O2对ARPE-19细胞的损伤浓度和时间,以及筛选乳酸预处理的保护浓度和时间。Western Blot法分别检测不同浓度H2O2以及联合乳酸预处理对ARPE-19细胞中LC3II、LC3I蛋白表达水平。2、自噬抑制剂3-MA抑制乳酸预处理诱导的自噬,Western Blot检测细
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目的:探讨乳酸预处理通过调节自噬减轻ARPE-19细胞以及视网膜氧化应激损伤的保护机制方法:1、CCK-8检测法检测H2O2对ARPE-19细胞的损伤浓度和时间,以及筛选乳酸预处理的保护浓度和时间。Western Blot法分别检测不同浓度H2O2以及联合乳酸预处理对ARPE-19细胞中LC3II、LC3I蛋白表达水平。2、自噬抑制剂3-MA抑制乳酸预处理诱导的自噬,Western Blot检测细胞内LC3II、LC3I、p62蛋白表达水平;通过转染EGFP-LC3B质粒观察自噬体的形成情况;CCK-8法检测各组细胞增殖活性。流式细胞术检活性氧ROS水平,线粒体膜电位MMP的水平;Calcein-AM/PI荧光双染法检测ARPE-19细胞死亡的情况。3、通过在C57/BL6小鼠玻璃体腔注射乳酸、乳酸+3-MA进行预处理,再通过腹腔注射Sodium iodate（碘酸钠）诱导氧化应激模型。运用HE染色检测视网膜组织结构的变化,TUNEL荧光检测视网膜RPE层的凋亡情况。结果:1、低浓度H2O2处理ARPE-19细胞增加自噬,高浓度处理细胞自噬水平又恢复低水平,细胞活力随浓度增加而下降;乳酸预处理之后增加自噬水平,并且增加细胞活力,降低H2O2诱导的ROS水平和H2O2对膜电位损伤程度。2、3-MA阻断了乳酸诱导的自噬发生水平、加剧ROS生成和膜电位的下降。3、HE染色结果显示,碘酸钠处理小鼠后,小鼠视网膜色素上皮层连续性消失,外核层细胞排列紊乱,视网膜厚度变薄。乳酸预处理减轻了碘酸钠对视网膜结构的损伤,视网膜色素上皮层结构连续性比碘酸钠处理组稍好,外核层厚度明显增加。TUNEL实验结果表明碘酸钠增加了RPE层细胞凋亡,乳酸预处理减少碘酸钠诱导的细胞凋亡水平。结论:1、乳酸预处理ARPE-19细胞可能通过增加自噬,减少H2O2对细胞活性的抑制,减少ROS生成、膜电位下降和细胞死亡。2、乳酸预处理可以减轻碘酸钠诱导的视网膜氧化应激损伤,减少视网膜组织结构损伤程度,减少RPE层的细胞凋亡。3-MA阻断乳酸预处理诱导的自噬之后,降低了乳酸预处理对视网膜的保护作用。
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