大黄鱼(Larimichthys crocea)是我国重要的海水网箱养殖鱼类。近年来,随着大黄鱼养殖规模的不断扩大,其病害日益严重,已成为制约大黄鱼养殖业持续健康发展的瓶颈之一,其中细菌性疾病是养殖大黄鱼最常见的病害。目前,大黄鱼细菌病主要采用抗生素进行防治,然而抗生素大量或长期使用所导致的药物残留、病原菌耐药性,及环境污染等问题,不仅影响了其出口创汇,造成了经济损失,而且对生态环境及人民健康造成了严重威胁。疫苗接种是鱼类病害免疫防治的主要途径和发展方向。因此,开展大黄鱼免疫的分子与细胞学基础研究及针对重要病原菌的疫苗研发,将为大黄鱼细菌病的免疫防治提供理论依据和新途径。二氢硫辛酰胺脱氢酶(dihydrolipoamide dehydrogenase,DLD)是生物体内能量代谢链上的重要分子,广泛存在于生物体中。本文从实验室保藏的溶藻弧菌基因组DNA中PCR扩增获得了 DLD的基因,并利用原核表达系统获得了重组DLD蛋白。将重组DLD免疫大黄鱼,发现其血清中溶菌酶活性显著高于对照组。同时,通过抗大黄鱼IgM抗体发现,免疫后60 d内大黄鱼血清中抗DLD抗体滴度始终处于较高水平(达1:256);此外,在溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的攻毒实验中,经DLD免疫的大黄鱼相对保护率(RPS)分别为63%、65%,显示出DLD作为亚单位疫苗的研发潜力。为了进一步了解大黄鱼针对细菌疫苗免疫应答的细胞学基础,本文分离鉴定了大黄鱼IgM+B淋巴细胞。首先使用protein A亲和柱从大黄鱼血清中直接纯化得到IgM。大黄鱼IgM在血清中为四聚体,约800 kDa,经SDS-PAGE分析鉴定,其单体重链分子量约74 kDa、轻链分子量约25 kDa,与预测大小相符。通过该蛋白免疫小鼠、杂交瘤细胞融合及三轮有限稀释杂交瘤细胞,成功制备了一批抗大黄鱼IgM单克隆抗体,Western blot和免疫荧光(Immunofluorescence,IF)分析鉴定了该抗体的特异性;进而结合流式细胞仪鉴定了利用单抗特异性识别的一群细胞,通过该单克隆抗体建立了大黄鱼IgM+B淋巴细胞免疫磁珠分选(Magnetic activated cell sorting,MACS)系统,获得了纯度达95%的IgM+淋巴细胞,通过细胞表面标志基因(IgH、IgL等)的表达分析鉴定其为大黄鱼IgM+B淋巴细胞。大黄鱼IgM+B淋巴细胞的鉴定为其功能及其所涉及免疫应答机制研究创造了条件。综上,本文鉴定了一种对大黄鱼致病弧菌具有良好免疫保护效果的溶藻弧菌蛋白DLD;成功制备了可用于大黄鱼疫苗免疫效果评价及IgM+B淋巴细胞分选的单克隆抗体,并鉴定了大黄鱼IgM+B淋巴细胞。这些成果为溶藻弧菌亚单位疫苗的研发及大黄鱼B淋巴细胞相关的免疫机制研究奠定了基础。