【摘 要】
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铁坏死是近年提出的一种新型细胞死亡方式,为了系统地研究铁坏死的机制,课题组进行了RNAi的基因组文库的筛选发现PKC是铁坏死的正向性调节因子。蛋白激酶C家族的经典同工酶包括PKCα,PKCβI,PKCβII和PKCγ。本文首在HT1080细胞,MEF小鼠胚胎成纤维细胞和MDA-MB-231乳腺癌细胞发现PKC抑制剂能够比较明显地抑制铁坏死作用。随后主要应用sh RNA这种技术手段在这三种细胞系中对
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铁坏死是近年提出的一种新型细胞死亡方式,为了系统地研究铁坏死的机制,课题组进行了RNAi的基因组文库的筛选发现PKC是铁坏死的正向性调节因子。蛋白激酶C家族的经典同工酶包括PKCα,PKCβI,PKCβII和PKCγ。本文首在HT1080细胞,MEF小鼠胚胎成纤维细胞和MDA-MB-231乳腺癌细胞发现PKC抑制剂能够比较明显地抑制铁坏死作用。随后主要应用sh RNA这种技术手段在这三种细胞系中对于PKCβ进行敲低,在PKCβII敲低的细胞系中铁坏死有明显的延迟或抑制作用。为了进一步证实PKC在铁坏死中的特异性,我分别在MDA-MB-231细胞中过表达了PKCα,PKCβI,PKCβII和PKCγ的突变失活型质粒,发现只有PKCβI和PKCβII表达蛋白的缺失能够抑制铁坏死而PKCα和PKCγ蛋白的缺失并不能起到抑制作用。当在PKCβ敲低的MDA-MB-231乳腺癌细胞中进一步恢复PKCβ表达后,细胞重新对铁坏死变得敏感。总而言之,该课题揭示了PKC蛋白激酶是铁坏死重要的正向性调节因子。接下来会进行免疫共沉淀实验检测下游靶标分子。
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