【摘 要】
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水泡性口炎是由水泡性口炎病毒引起的一种急性、热性、高度接触性的人畜共患传染病。目前,常规的VSV检测技术主要有病毒分离鉴定、中和试验、补体结合试验、琼脂扩散试验等方
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水泡性口炎是由水泡性口炎病毒引起的一种急性、热性、高度接触性的人畜共患传染病。目前,常规的VSV检测技术主要有病毒分离鉴定、中和试验、补体结合试验、琼脂扩散试验等方法,但在临床上不能够快速、准确地诊断该病,这些诊断方法的滞后已影响到对该病流行时的快速检测。因此,建立VSV特异、敏感、快速、准确的诊断方法具有重要的意义。本研究根据GeneBank中公布的水泡性口炎病毒G基因序列设计了一对特异性引物,在优化反应条件后,建立起一种用于VSV快速检测的RT-PCR方法,该方法经证实特异性强、敏感性高。进一步构建VSV G基因的原核表达载体pet-28a(+)-G,经IPTG诱导表达得到目的蛋白,经过Western-blot方法检测融合蛋白具有良好的免疫原性。在此基础上建立利用ELISA诊断VS的方法。本实验经过筛选出ELISA检测VS的最佳反应条件:将纯化后的重组蛋白稀释成3.125ug/ml包被酶标板,用BSA封闭2h,酶标二抗工作浓度的稀释比为1∶5000。通过重复性试验、交叉性反应等试验的验证,结果表明所建立的ELISA方法具有重复性好、特异性强和灵敏度高等优点。本实验的结果可以为今后进一步建立特异、敏感、快速、准确的水泡性口炎病毒诊断方法奠定基础。
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