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目的:探讨温阳活血方含药血清对体外培养的大鼠肾成纤维细胞(rats renal fibroblasts,RRF)结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响。
方法:以单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)法制备肾间质纤维化动物模型,给予药物干预后14d获取含药血清。采取消化法获取RRF,并体外培养。所获细胞分别给予不同浓度的温阳活血方和西药福辛普利含药血清干预培养72h,用酶联免疫吸附检测法检测细胞培养上清中纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)、层粘蛋白(laminin,LN)浓度,免疫细胞化学法检测RRF表达CTGF水平,实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RTQ-PCR)检测细胞转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)mRNA、CTGF mRNA的表达。
结论:温阳活血方可能通过抑制被激活的RRF表达TGF-β1 mRNA、CTGF mRNA,进而抑制了RRF表达TGF-β1、CTGF水平,从而降低了RRF分泌FN、LN浓度,使细胞外基质堆积减少,起到对肾间质纤维化的治疗作用。温阳活血方可能主要通过桃仁、肉苁蓉而起作用。临床上温阳活血方中肉苁蓉、桃仁的用药量宜选择中剂量。