abLIM1在细胞皮层中的功能研究

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细胞皮层是位于动物细胞细胞膜下面的网状结构,其基本组成包括微丝、肌球蛋白和众多其他微丝结合蛋白。细胞皮层对于细胞形态的维持、细胞分裂、细胞迁移和组织的形态发生具有重要作用。细胞皮层的研究主要是在红细胞中进行的,因此对非红细胞中细胞皮层的结构及其调节了解的较少。abLIM1是一个微丝结合蛋白,在线虫神经元轴突的寻路过程中扮演重要角色。然而,目前对abLIM1在哺乳动物细胞中功能的研究却较少。同时,abLIM1是否在细胞皮层结构中发挥作用也不清楚。  本研究中我们证明abLIM1能够与一系列细胞皮层蛋白发生相互作用,abLIM1与细胞皮层主要结构蛋白βⅡspectrin在细胞皮层处共定位,同时abLIM1在细胞和组织样品中广泛表达,这都证实abLIM1是细胞皮层结构的一个新的组分。为了研究abLIM1在哺乳动物细胞中的功能,我们在RPE1细胞中通过RNAi技术对abLIM1的表达进行了敲低。我们发现abLIM1表达的下调导致细胞在自由迁移和铺展过程中发生明显的质膜出泡现象并引起细胞迁移的异常,通过扫描电镜观察我们证明敲低abLIM1的表达导致细胞皮层结构由致密变为稀疏,免疫印迹证明abLIM1表达的下调并未影响细胞内myosinⅡ的磷酸化水平,回复实验中外源abLIM1能部分回复敲低内源abLIM1所引起的细胞质膜出泡和细胞迁移异常现象,因此敲低abLIM1的表达会导致细胞皮层结构的不稳定从而引起细胞质膜出泡和细胞迁移异常。接下来我们进一步证明abLIM1通过DH结构域与βⅡspectrin的CH结构域发生直接相互作用,同时敲低abLIM1的表达大大减弱了βⅡspectrin在细胞皮层处的定位,下调βⅡspectrin的表达也明显减弱了abLIM1在细胞皮层处的定位,这说明二者的相互作用促进了彼此在细胞皮层处的定位。通过体外微丝聚合实验我们证明abLIM1能够通过C端使微丝发生沉淀并交联微丝。因此,abLIM1能够通过结合spectrin和交联微丝两种方式稳定细胞皮层结构。在线虫中,我们证明UNC-115/abLIM1突变体中的运动神经元轴突结构变得不稳定,在外力作用下更容易发生形变并受到破坏,这说明abLIM1作为细胞皮层结构蛋白对维持线虫神经元轴突结构的稳定非常重要。  综上,我们的研究证明了abLIM1能够结合spectrin并交联微丝,这对于维持细胞皮层结构的完整性非常重要;abLIM1蛋白的缺失会导致细胞皮层结构的不稳定从而引起细胞发生质膜出泡进而使细胞迁移发生异常,同时线虫中UNC-115/abLIM1的突变会导致线虫神经元轴突结构的不稳定。我们的工作不仅为非红细胞中细胞皮层结构的研究提供了新的内容,而且证实了abLIM1在哺乳动物细胞及线虫神经元中新的功能,这为将来对细胞皮层结构和功能以及abLIM1功能的研究奠定了基础。
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