论文部分内容阅读
目的:研究中药QHF复方对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其可能的作用机制,为QHF的临床应用提供理论依据。 方法:(1)CCK8法检测HGF、QHF对乳腺癌MCF-7细胞生长增殖的影响;并观察中药QHF复方对HGF促进乳腺癌MCF-7细胞增殖的拮抗作用。(2)细胞划痕实验和Transwell实验检测中药QHF复方对乳腺癌MCF-7细胞运动、迁移侵袭的影响;并采用c-Met抑制剂及其下游PI3K、ERK抑制剂干预乳腺癌MCF-7细胞,检测该HGF/c-Met及其下游PI3K/Akt、MAPK/ERK信号通路与乳腺癌MCF-7细胞迁移、侵袭的关系。(3)Western blot检测中药QHF复方对乳腺癌MCF-7细胞中HGF表达的影响;检测中药QHF复方、HGF及c-Met抑制剂对乳腺癌MCF-7细胞中c-Met、p-c-Met表达的影响;检测中药QHF复方、c-Met抑制剂及其下游PI3K、ERK抑制剂对乳腺癌 MCF-7细胞中 Akt、p-Akt、ERK、p-ERK及 VEGF、MMP-2、MMP-9表达的影响,探讨中药QHF复方通过影响HGF/c-Met及其下游信号通路抑制乳腺癌MCF-7细胞迁移、侵袭能力的具体机制。 结果:(1)CCK8实验结果显示:HGF可不同程度促进乳腺癌MCF-7细胞增殖,而中药 QHF复方不但可不同程度抑制乳腺癌 MCF-7细胞增殖,还可显著拮抗HGF(40ng/ml)对乳腺癌MCF-7细胞增殖的促进作用。(2)划痕实验结果显示:与对照组相比,HGF组细胞运动迁移距离明显增长,而QHF组、c-Met抑制剂组及其下游PI3K、ERK抑制剂组细胞迁移距离明显缩短;与HGF组比较,QHF与HGF共同干预组细胞迁移距离明显缩短,提示HGF有促进MCF-7细胞迁移的作用趋势,并且这种作用趋势可被中药QHF复方拮抗;Transwell迁移和侵袭实验结果显示:与对照组相比,HGF组穿过滤膜的细胞数量明显增多,而QHF组、c-Met抑制剂组及其下游PI3K、ERK抑制剂组穿过滤膜的细胞数量均明显减少;与HGF组比较,QHF与HGF共同干预组穿过滤膜的细胞数量明显减少,提示HGF可促进MCF-7细胞侵袭,且这种作用趋势可被中药QHF复方拮抗;QHF组与c-Met、PI3K、ERK抑制剂组比较,细胞的迁移与侵袭能力之间的差异无统计学意义,说明人乳腺癌MCF-7细胞的迁移侵袭可能与HGF/c-Met及其下游PI3K/Akt、MAPK/ERK信号通路的活化有关。(3) Western blot实验结果显示:中药QHF复方可明显抑制乳腺癌MCF-7细胞中HGF及p-c-Met的表达(P<0.01);HGF可促进p-c-Met的表达,但是HGF的这种促进作用可被中药QHF复方拮抗(P<0.01);中药QHF复方可明显抑制乳腺癌MCF-7细胞中p-Akt、p-ERK、VEGF、MMP-2、MMP-9的表达(P<0.01);运用 c-Met抑制剂后,其下游PI3K/Akt、MAPK/ERK通路中p-ERK、p-Akt、VEGF、MMP-2、MMP-9的表达明显被抑制(P<0.01)。各组中 Akt、ERK的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。 结论:中药QHF复方可抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭,这种作用可能是通过以下机制实现的:通过抑制HGF的旁分泌或自分泌,直接或间接地抑制其配体c-Met磷酸化,使HGF/c-Met信号通路失活,进而抑制HGF/c-Met信号通路及下游MAPK/ERK信号通路和PI3K/Akt信号通路活化,最终通过抑制MMP-2、MMP-9和VEGF的表达,抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、黏附及血管生成等环节,抑制乳腺癌细胞的迁移侵袭。