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目的:
检测白细胞介素-23(IL-23)在胶原诱导关节炎(CIA)大鼠血清中的浓度及关节滑膜中的表达,并观察来氟米特干预后上述指标的变化情况,初步探讨IL-23在大鼠CIA发生、发展中的可能作用及来氟米特对CIA大鼠IL-23表达的影响。
方法:
将50只雄性SD大鼠随机分为空白组和造模组,空白组10只,造模组40只;造模组大鼠尾根部皮下注射胶原乳剂(0.5ml/只),一周后等量乳剂相同方法加强免疫以诱导CIA模型,空白组相同时间、相同部位注射等体积生理盐水;造模后4周(即给药前)对造模组大鼠进行关节炎评分,记录AI值。选择20只CIA诱导成功(AI≥6分)大鼠随机分为模型组和来氟米特组(LEF组),每组10只;LEF组每天给予米氟米特(5mg/(kg·d)灌胃,空白组及模型组给予等量生理盐水灌胃,持续三周;给药前及给药后1、2、3周分别记录各组大鼠体重、足爪容积及模型组与LEF组大鼠的AI值;给药前及给药后1、2、3周分别自尾静脉留取各组大鼠静脉血,以ELISA的方法检测血清IL-23的浓度;给药后3周处死大鼠留取双侧膝关节滑膜,福尔马林液中浸泡两天后石蜡包埋,切片行HE染色观察病理改变并进行评分,另切片进行免疫组织化学染色观察IL-23的表达情况并进行半定量分析。
结果:
(1)造模组大鼠于造模后1周开始出现关节及足爪肿胀并逐渐加重,造模后2周肿胀明显,造模后4周少数大鼠出现关节强直、足爪挛缩。造模前各组大鼠体重、足爪容积无差异(P>O.05);造模后4周,造模组大鼠体重较空白组明显降低(P<O.01),足爪容积较空白组明显增加(P<O.01),关节炎评分显示共有27只大鼠AI值≥6分。
(2)给药前,LEF组大鼠体重、足爪容积与模型组之间无差异(P>0.05),与空白组之间差异显著(P<0.01);AI值与模型组之间无显著差异(P>0.05)。给药后3周,LEF组大鼠体重较模型组明显增加(P<0.01),但仍明显低于空白组(P<0.01);足爪容积明显小于模型组(P<0.01),与空白组之间差异不显著(P>O.05);AI值较模型组明显减小(P<0.O1)。
(3)给药前,模型组及LEF组大鼠血清IL-23浓度较空白组明显增高(P<O.O1);给药后3周,LEF组血清IL-23浓度较模型组明显减低(P<0.01),但仍明显高于空白组(P<0.01)。
(4)关节滑膜HE染色显示空白组大鼠关节滑膜无明显增生,滑膜下仅见少量炎性细胞;模型组大鼠滑膜增厚,大量炎性细胞浸润,有血管翳及新生血管生成;LEF组大鼠滑膜增生、炎性细胞浸润及血管生成均较模型组减轻。病理学评分显示模型组及LEF组关节滑膜病理积分较空白组明显增高(P<0.01),LEF组病理积分较模型组明显降低(P<0.01)。
(5)关节滑膜免疫组织化学染色显示空白组大鼠滑膜层仅见少量IL-23阳性表达;模型组大鼠滑膜层及滑膜下组织中均可见较多IL-23阳性表达;LEF组滑膜及滑膜下IL-23阳性表达较模型组减少。免疫组织化学半定量分析显示模型组及LEF组关节滑膜IL-23表达的相对光密度比值较空白组明显增加(P<0.01),LEF组较模型组明显减少(P<0.O1)。
结论:CIA大鼠血清IL-23浓度及关节滑膜IL-23的表达较正常大鼠明显增高,提示IL-23可能是大鼠CIA发生、发展中的促炎因子之一;来氟米特干预可以缓解CIA大鼠关节肿胀程度,并降低血清IL-23浓度及关节滑膜IL-23的表达,提示来氟米特在缓解CIA大鼠炎症的过程中可能包含对IL-23的抑制作用。