第一章文献研究目的:帕金森病是目前第二大老年性退行性病变。针刺治疗帕金森病一直是该领域的研究热点。本研究通过检索国内外针刺治疗帕金森病的相关文献,对目前针刺治疗帕金森病的研究现状进行统计,为本课题研究提供文献基础。方法:本研究检索数据库为CNKI、CBM、维普、万方、Pubmed,制定检索式“帕金森”AND“针刺”并进行专业检索,检索自建库至2020年2月收录帕金森病相关文献,根据纳入标准和排除标准,题录导入Note Express3.2.0软件,阅读文献标题与摘要,删除与主题不符文献后下载筛得的文献全文,根据纳入和排除标准整合文献进行后续筛选工作。对最终筛选文献分析其基本特征、疾病模型、针刺穴位、研究层次,运用Excel对数据进行整理、归纳、分析。结果:通过分析,共获得文献1654篇论文。根据纳入标准和排除标准,排除重复报道最终确定鼠类实验文献数目为147篇。学位论文44篇,期刊论文103篇,最早年份1996年,最近年份2020年。总结出当前用于帕金森病建模的鼠类主要有C57BL/6雄性小鼠、SD大鼠、Wistar大鼠;建模试剂主要有鱼藤酮、6-OHDA、MPTP、LPS等生物化学方法,也有单侧MFB损伤、机械损伤MFB等物理方法。研究层次涵盖了基因组学、转录组学、蛋白组学、代谢组学等分子生物学内容,常用穴位有风府、太冲、足三里等穴位和脑神经反射区,为随后开展的研究奠定文献基础。结论:1.帕金森病模型品系主要有SD大鼠、C57BL/6小鼠、Wistar大鼠等;2.帕金森病造模方法主要有MPTP腹腔注射模型、6-羟多巴胺(6-OHDA)脑内注射模型、鱼藤酮颈背部皮下注射模型等;3.针刺治疗帕金森病的研究领域涵盖转录组学、蛋白组学、代谢组学等。第二章实验研究目的:帕金森病是目前常见的影响老年人身心健康的中枢神经系统退行性疾病。针灸适应症广泛,在治疗帕金森病方面已取得了显著的效果。本课题组前期研究显示电针可以有效防治帕金森病的发生发展可能与其通过调控内质网应激,保护多巴胺能神经元相关。但电针如何通过调控ATF4/Parkin信号通路来治疗帕金森病鲜有研究。本实验选用颈背部皮下注射鱼藤酮复制帕金森大鼠模型,观察电针“风府”“太冲”穴对帕金森病大鼠中脑黑质ATF4、Parkin的影响,探讨电针治疗PD的可能机制。方法:SPF级雄性健康SD大鼠60只,经过三次旷场实验确保大鼠无自发性行为学异常,适应性喂养一周。按照随机数字表分组,随机分为正常组(12只)、假手术组(15只)、造模组(33只)。采用颈背部皮下注射鱼藤酮复制帕金森病大鼠模型,造模组给予鱼藤酮—二甲亚砜乳化液(鱼藤酮:二甲亚砜:生理盐水溶液=1g:3.5L:0.5L)颈背部皮下注射,按大鼠体质量每日定时1次给药,2mg/kg,连续28天;假手术组给予不含鱼藤酮的二甲亚砜生理盐水混合液(二甲亚砜:生理盐水溶液=3.5L:0.5L)颈背部皮下注射,按大鼠体质量每日定时1次给药,2mg/kg,连续28天;正常组:每日正常抓取称重,不予其他处理。造模后,根据陈忻等建立的行为学评分体系观察各组大鼠行为学改变并评分。将造模组行为学评分在2-8分范围内的大鼠视为成功模型,随机抽取27只成功模型,再随机抽取3只成功模型大鼠行左心室多聚甲醛内固定术固定脑组织,免疫组化法检测大鼠中脑黑质TH表达水平做组织学鉴定模型。造模成功后,正常组12只,假手术组随机保留12只,造模组随机分为模型组12只,电针组12只。用旷场实验观察各组大鼠自主活动的行为学变化。电针组电针“风府”“太冲”穴,正极-“风府”,负极-“太冲”(双侧“太冲”隔日交换接电针),波形-连续波,频率-2Hz,电流-1m A,20min/次,1次/天,连续治疗14天。正常组、假手术组及模型组:每天采取与电针组相同的抓取、固定方法,不予治疗。治疗后,根据陈忻等建立的行为学评分体系观察各组大鼠行为学改变并评分;用旷场实验观察各组大鼠自主活动的行为学变化。各组大鼠行为学检测结束后,每组随机抽取6只行左心室多聚甲醛内固定术,采用免疫组化法检测大鼠中脑黑质TH、α-syn的表达变化;每组余下6只大鼠于冰面上迅速断头取出新鲜大脑组织,蛋白免疫印迹法检测大鼠中脑黑质ATF4、Parkin的蛋白表达变化;实时荧光定量—PCR检测大鼠中脑黑质ATF4 m RNA、Parkin m RNA的基因表达变化。结果:1实验各组大鼠行为学观测变化造模后,与正常组、假手术组比较,模型组和电针组行为学观测评分显著升高(P<0.01)。治疗后,与正常组、假手术组比较,模型组行为学观测评分显著升高(P<0.01);与模型组比较,电针组行为学观测评分显著降低(P<0.01)。2实验各组大鼠行为学检测变化造模后,与正常组、假手术组比较,模型组和电针组大鼠自主运动的总路程、自主运动的总时间、自主运动的平均速度、垂直运动频次显著降低(P<0.01),休息总时间显著升高(P<0.01)。治疗后,与正常组、假手术组比较,模型组大鼠自主运动的总路程、自主运动的总时间、自主运动的平均速度、垂直运动频次显著降低(P<0.01),休息总时间显著升高(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠自主运动的总路程、自主运动的总时间、自主运动的平均速度、垂直运动频次显著升高(P<0.01),休息总时间显著降低(P<0.01)。3实验各组大鼠中脑黑质TH的表达变化与正常组、假手术组比较,模型组大鼠中脑黑质TH平均吸光度显著降低(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠中脑黑质TH平均吸光度显著升高(P<0.01)。4实验各组大鼠中脑黑质α-syn的表达变化与正常组、假手术组比较,模型组大鼠中脑黑质α-syn平均吸光度显著升高(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠中脑黑质α-syn平均吸光度显著降低(P<0.01)。5实验各组大鼠中脑黑质ATF4、Parkin蛋白表达变化与正常组、假手术组比较,模型组大鼠中脑黑质ATF4蛋白表达显著升高(P<0.01),Parkin蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,电针组大鼠中脑黑质ATF4蛋白表达显著降低(P<0.01),Parkin蛋白表达显著升高(P<0.01)。6实验各组大鼠中脑黑质ATF4 m RNA、Parkinm RNA的表达变化与正常组、假手术组比较,模型组大鼠中脑黑质ATF4 m RNA基因表达水平显著升高(P<0.01),Parkin m RNA基因表达水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,电针组大鼠中脑黑质ATF4 m RNA基因表达水平显著降低(P<0.01),Parkin m RNA基因表达水平显著升高(P<0.01)。结论:1.鱼藤酮可以较好地诱导帕金森病模型大鼠;2.电针可以有效改善帕金森病模型大鼠的行为学异常表现;3.电针可以有效清除或降解过表达或错误折叠的α-syn,清除神经毒性,改善多巴胺能神经元活性,保护多巴胺能神经元;4.电针治疗帕金森病模型大鼠的效应机制可能与电针“风府”“太冲”穴可以有效激活ATF4/Parkin信号通路,缓解内质网应激,保护DA能神经元,阻止或延缓帕金森病的进展有关。