【摘 要】
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目的 通过观察骨髓基质细胞(BMSCs)移植治疗缺血性脑梗死对神经生长因子(NGF)的影响,探讨BMSCs治疗脑梗死的效果及机理,为临床治疗提供理论依据。 方法 取45只Wista
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目的 通过观察骨髓基质细胞(BMSCs)移植治疗缺血性脑梗死对神经生长因子(NGF)的影响,探讨BMSCs治疗脑梗死的效果及机理,为临床治疗提供理论依据。 方法 取45只Wistar大鼠,随机将大鼠分配到3组中,每组动物15只,分别为空白对照组、盐水对照组及治疗组。改良的Longa栓线法制作大鼠局灶性大脑中动脉缺血(MCAO)模型,1小时后再灌注。从幼年(14天)大鼠的股骨和胫骨取原代骨髓基质细胞,按Fridenshtein方法采集、分离、培养骨髓基质细胞,免疫细胞化学方法鉴定骨髓基质细胞。取3-5代的细胞,在接种前一天以终浓度0.1M的溴脱氧尿苷(BrdU)标记;缺血24小时后治疗组(n=15)尾静脉注射预先标记BrdU的3×10~6骨髓基质细胞,盐水对照组(n=15)尾静脉注射1ml生理盐水,空白对照组(n=15)不注射。缺血后3天、7天及14天采用神经损伤评分(NSS)观察大鼠神经功能改善情况。 免疫组化测定:将3个不同处理组大鼠在3天、7天、14天用10%水合氯醛(3.5ml/kg)腹腔注射麻醉,用生理盐水及4%多聚甲醛行心内灌注后取脑、固定、石蜡包埋及连续冠状切片(7μm)。应用SABC法对切片进行免疫组化染色,一抗分别为鼠抗BrdU(1:200)、兔抗NGF(1:200),二抗分别为生物素化羊抗鼠IgG和生物素化羊抗兔IgG。显色底物为DAB显色剂。最后,将染色后的脑组织切片经显微照像后采集、分析,用SPSS11.0统计软件做方差分析。
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