福建栽培和野生香蕉种质资源离体保存及RAPD分析

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 22次 | 上传用户:gin901122
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本研究对福建香蕉种质资源进行调查,并以福建53份香蕉种质资源为材料,进行了离体保存、形态学鉴定等研究。同时,利用RAPD技术进行了福建10个主要香蕉品种以及福州、三明两地野生蕉群体的遗传多样性分析和聚类分析。主要研究结果如下:1.福建野生香蕉的调查和观察福建广泛分布有野生香蕉。福州野生蕉会大量结籽,可以判断为二倍体。按照Simmonds and Shepherd(1955)的分类方法,二倍体香蕉中,福州野生蕉绝大多数性状与尖叶蕉相同,得分为22。因此将福州野生蕉归为AA类群。不过,在胚珠排列和果实形态上,福州野生蕉与典型的AA原始种的特征明显不同。因此,福州AA野生蕉可能在进化上与其它地方的AA原生蕉已经产生一定的遗传差异,或者在进化过程中获得了少量的B染色体组的基因。三明野生蕉与福州野生蕉有相异之处。三明野生蕉得分为47,归为AB类。2.福建香蕉种质资源的试管苗离体种质保存试验结果表明:香芽蕉丛生芽苗以MS+甘露醇30g/L+6-BA1.0mg/L+IAA0.1 mg/L配方的培养基来保存为宜,室温控制在204±1℃,每天16h光照,光强1000Lux左右条件下,能够保存培养6个月,不会黄化死亡;在培养基中加入甘露醇可以有效抑制试管苗生长,甘露醇的抑制效果与蔗糖相比更强烈;添加BA的培养基比KT的,可忍耐更长继代时间;低浓度的不同生长素对试管苗保存影响不明显。采用优化方法保存了福建栽培和野生香蕉种质资源53份。3.香蕉基因组DNA提取以及RAPD-PCR条件的优化应用改良CTAB法提取各品种类型的香蕉基因组DNA,获得了较高产量和质量的DNA。并对RAPD反应程序中的一些重要参数进行摸索和优化,建立了稳定的、适用于福建香蕉遗传多样性和遗传分化研究的RAPD—PCR反应体系。经过优化后的反应体系为:在25μL的反应体系中,模板DNA栽培蕉用量为50ng、野生蕉为62.5ng,引物浓度为0.8μmol/L,Taq酶的用量栽培香蕉为1.0U,二倍体野生蕉为2.0U,mg2+浓度和dNTP浓度分别是2.5mmol/L、300gmol/L。循环参数:退火温度37℃、退火时间60s,延伸时间120s、循环次数为45个循环。4.福建10个栽培品种类型和野生种亲缘关系的RAPD分析对福建10个栽培品种类型和野生种进行RAPD分析结果表明:福州野生蕉和三明野生蕉在阈值在0.52划分时,与其他三倍体栽培种区别开来;在阈值在0.30划分时,又可将三明野生蕉、福州野生蕉区别开来,划分清晰。这与Simmond分类法的结果一致。但是,从遗传距离表可看出福州野生蕉与三倍体AAA香蕉的遗传距离较与ABB大蕉遗传距离大,由此可以得出福州野生蕉较三明野生蕉与ABB型香蕉的遗传距离较近,与AAA型香蕉的遗传距离较远。这与Simmond分类法的结果有所差异。这与三明野生蕉为AB杂合体、自交后代分离,以及实生繁殖引起的自然变异有关。5.利用RAPD技术进行三明和福州野生蕉群体的遗传多样性和聚类分析应用POPGENE软件对三明野生蕉16个植株和福州野生蕉21个植株进行了RAPD结果的多态性比较和聚类分析,研究结果表明:(1)三明野生蕉Nei’s基因多样性(H)为0.4110,福州为0.2399;福州、三明野生蕉平均等位基因数为2.0;三明野生蕉的有效等位基因数为1.7164,福州为1.3249;三明野生蕉Shannon信息指数为0.5995,福州为0.4003;谠明三明野生蕉和福州野生蕉具有高水平的遗传多样性水平,这与其生长在地理条件比较恶劣、气候多变、海拔较高的环境中,积累了大量的遗传变异有关;(2)三明野生蕉较福州野生蕉的遗传多样性水平高,这与三明野生蕉为AB杂合体、自交后代分离,以及实生繁殖引起的自然变异有关,另外还与三明野生蕉居群较大、分布范围较广、人为破坏少的生长环境相符;(3)三明野生蕉和福州野生蕉两居群之间基因分化系数为(Gst)为4.84%,基因流为9.8373,证明三明野生蕉和福州野生蕉的遗传变异主要存在居群内,两居群间存在地理隔离。
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