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埃博拉病毒(Ebolavirus，EBOV)的病毒核酸为单股负链RNA，其归属于丝状病毒科。由EBOV引起出血热首次报道于1976年，致死率高达90％。历史上最为严重的一次埃博拉疫情是2014年在西非爆发的，导致超过2万人感染，1.8万多人死亡。因此，研制具有良好免疫原性疫苗及有效治疗药物成为阻止埃博拉疫情的首要工作。有研究表明，病毒基因编码的I型跨膜蛋白GP是EBOV唯一的表面包膜蛋白，其与EBOV的感染过程存在密切关系，所以GP是最为理想的诱导产生抗EBOV中和抗体的抗原。 在研究针对EBOV的防治药物中抗体药物因为相对安全、靶向特异、副作用小等优点成为研究热点。2014年抗体治疗药物ZMapp取得瞩目的疗效。ZMapp是单克隆抗体混合注射剂，主要成分为MB-003(又称为:Mapp)和ZMAb。MB-003是由三种抗埃博拉单克隆抗体组成，其中有两株是鼠源单抗。因此，研制鼠源单克隆抗体在EBOV诊断和治疗方面具有现实意义。有研究表明，重组蛋白疫苗可以诱导产生包含性中和抗体，同时，由于在运输、使用上具有优势，重组蛋白疫苗适合医疗条件差的地区使用。重组蛋白疫苗研制的瓶颈是在短时间内大量制备GP蛋白。蛋白制备的表达系统包括原核和真核表达系统。在真核表达系统中，HEK293细胞系和CHO细胞系是最常用的两种细胞系。尤其是HEK293细胞瞬时表达系统，由于无需筛选细胞株，可以在较短时间内制备大量重组蛋白，在传染病预防控制方面应用广泛。 因此本研究首先构建了的真核表达质粒pXG4678-mod-GP-Fc-2，利用PEI介导瞬时转染HEK293F细胞平台获得埃博拉病毒GP重组蛋白并进行检测验证，通过分析真核表达系统中影响重组蛋白表达的因素，确定瞬时转染的最优条件，从而大大提高了GP重组蛋白表达量，建立关于埃博拉病毒GP重组蛋白PEI介导悬浮细胞HEK293F瞬时转染技术平台。其次本研究利用杂交瘤细胞技术将用上述方法表达的重组蛋白GP免疫后小鼠的B细胞和小鼠骨髓瘤SP2/0细胞进行细胞融合，制备埃博拉单克隆抗体并进行检测和鉴定。 实验结果表明本研究构建的真核表达质粒表达的GP重组蛋白，在生物学结构和功能上与埃博拉病毒表面糖蛋白GP相似，可以用于生物学检测，成功建立的悬浮细胞HEK293F瞬时转染技术平台，可以使GP重组蛋白表达量提高7倍多，为之后的抗体研究奠定基础;通过杂交瘤技术成功筛选出的4株单克隆抗体，并且4株抗体都是针对GP蛋白的特异性抗体，虽然没有中和活性但具有良好的结合活性，为继续筛选用于埃博拉病毒检测与治疗的的抗体打下基础。