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研究目的:1.探讨针刺对慢性疲劳综合征(CFS)模型大鼠NK细胞杀伤活性(NKCC)的影响;2.探讨针刺是否通过miR-34a-5p/ERK/pERK依赖或非依赖性途径调控NKCC而发挥对CFS的免疫调节作用。研究方法:1.实验一、针刺对CFS模型大鼠NKCC的影响研究:将30只SD大鼠随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、针刺组(C组),B、C组通过慢性束缚结合力竭游泳法建立CFS模型,治疗期间A、B组予捆绑固定,C组予针刺“肝俞”、“脾俞”、“肾俞”、“后三里”,得气后平补平泻,留针15分钟,治疗21d后麻醉采血,采用乳酸脱氢酶法检测各组NK细胞活性值。2.实验二、针刺调节CFS模型大鼠NKCC的miR-34a-5p/ERK/pERK机制研究,(1)第一部分:在实验一检测NKCC的同时,采用免疫印迹法检测NK细胞ERK1/2、pERK1/2表达,实时荧光定量PCR法检测NK细胞miR-34a-5p的表达。(2)第二部分:将20只大鼠按相同方法造模后随机分为miRNA拮抗组(D组)、生理盐水组(E组),分别腹腔注射miRNA拮抗剂和等体积生理盐水,予上述针刺干预,21d后麻醉采血,检测各组NK细胞活性值、NK细胞ERK1/2、pERK1/2和miR-34a-5p的表达。研究结果:1.实验一、针刺对CFS模型大鼠NKCC的影响:与A组相比,B组NK细胞活性值显著降低,差异有统计学意义(P=0.014);与B组相比,C组NK细胞活性值显著升高,差异有统计学意义(P<0.050);C组与A组NK细胞活性值差异无统计学意义(P=0.524)。2.实验二、针刺调节CFS模型大鼠NKCC的miR-34a-5p/ERK/pERK机制研究:(1)与A组相比,B组NK细胞miR-34a-5p表达显著下降,差异有统计学意义(P=0.008);与B组相比,C组NK细胞中miR-34a-5p的表达显著上调,差异有统计学意义(P=0.044)。(2)与A组相比,B组NK细胞ERK1/2、pERK1/2蛋白表达均显著降低,差异有统计学意义(P<0.001,P=0.017);与B组相比,C组NK细胞ERK1/2、pERK1/2表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.001,P=0.032)。(3)与E组相比,D组NK细胞miR-34a-5p的表达显著下降,差异有统计学意义(P=0.025);D组NK细胞ERK1/2、pERK1/2蛋白水平有降低趋势,差异不具有统计学意义(P=0.680,P=0.052);D组NK细胞活性值显著降低,差异有统计学意义(P=0.005)。研究结论:1.CFS模型大鼠NKCC显著降低,针刺可以显著提高CFS模型大鼠NKCC。2.针刺可有效上调CFS模型大鼠NK细胞显著降低的miR-34a-5p、ERK1/2、pERK1/2的表达,针刺可以通过miR-34a-5p/ERK/p ERK非依赖性途径调控CFS模型大鼠NKCC从而发挥对CFS免疫异常的调节作用。