益气健脾抗癌中药对胃癌裸鼠肝、肾脏蛋白激酶C影响的实验研究

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目的:观察益气健脾中药和益气健脾抗癌中药对胃癌裸鼠体质量,肝、肾脏重量,肝、肾脏器系数以及肝、肾脏蛋白激酶C(PKC)活性的变化,探讨益气健脾抗癌中药对胃癌裸鼠肝、肾脏蛋白激酶C活性的影响。材料与方法:1.实验动物与细胞株清洁级裸小鼠40只,20±2g/只,购于中国医科大学实验动物中心。动物合格证号:SCXK(辽)2008-0005。饲料为SPF级,购于中国医科大学实验动物中心,并购入无菌垫料。人胃癌SGC-7901细胞株,购于中国医科大学细胞生物实验室细胞库。2.实验方法(1)实验动物分组及处理40只裸小鼠中随机选取30只腋下接种人胃癌SGC-7901细胞株,将成瘤裸鼠随机分为模型组,补脾对照组和补脾抗癌组,每组10只,剩余10只未种瘤裸鼠设为空白组。空白组予0.9%NaCl溶液治疗;模型组予0.9%NaCl溶液;补脾对照组给予益气健脾中药;补脾抗癌组给予益气健脾抗癌中药合用。空白组及模型组用0.9%NaCl溶液0.4ml/天,灌胃14天。药物组分别给予相应中药0.4ml/天,灌胃14天。(2)胃癌裸鼠模型的制备选择对数生长期肿瘤细胞,细胞浓度调至107/ml,在裸鼠腋下接种肿瘤细胞0.1ml,相当于106细胞/只鼠,整个操作过程均要求无菌操作,每天观察肿瘤的生长情况[89]。接种15天后,以在接种部位出现肿瘤结节直径达0.8cm,质地较硬等指标认定为成瘤。(3)样品采集及指标检测(a)实验结束时,所有动物脱颈处死,打开腹腔,剥离腹膜,取新鲜组织,用0.9%NaCl溶液洗去血迹,观察动物的肝、肾组织大体情况并称重,计算脏器系数。脏器系数=脏器重量(g)/体质量(g)×100%。(b)肝、肾PKC测定: Western blot法检测蛋白表达。结果:1.裸鼠体质量、肝重、肾重测量结果与空白组比较,模型组体质量、肝重、肾重均明显下降。与模型组比较,补脾对照组与补脾抗癌组体质量、肝重、肾重均明显上升,但补脾对照组与补脾抗癌组体质量、肝重及肾重无明显差别。2.裸鼠肝系数、肾系数计算结果与空白组比较,模型组肝系数、肾系数降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,补脾对照组和补脾抗癌组肝系数、肾系数升高,差异有统计学意义(P<0.05)。而补脾对照组和补脾抗癌组两组组间各指标差异无统计学意义(P>0.05)。3.裸鼠肝、肾脏中PKC表达的检测结果与空白组比较模型组裸鼠肝脏、肾脏中PKC活性明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,补脾对照组和补脾抗癌组裸鼠肝脏、肾脏中PKC活性较模型组均下降且差异显著(P<0.01)。其中补脾抗癌组肝脏PKC活性下降较补脾组下降更为显著(P<0.01),PKC活性基本恢复至空白组水平;补脾抗癌组肾脏PKC活性下降较补脾组下降更为显著(P<0.01),但与空白组比较仍存在差异(P<0.05)。结论:1.胃癌裸鼠存在脾虚症状。2.益气健脾和益气健脾抗癌中药对胃癌裸鼠体质量、肝重、肾重、肝系数、肾系数具有调节作用。3.益气健脾和益气健脾抗癌中药对胃癌裸鼠肝、肾脏中PKC具有调节作用。4.益气健脾抗癌中药对胃癌裸鼠肝、肾脏PKC的调节作用优于益气健脾中药。
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