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糖尿病肾病是糖尿病重要的微血管并发症之一,它在病理结构上主要以系膜增生,基底膜增厚为特点,最终出现肾小球硬化、间质纤维化。P38是MAPK家族的成员之一,在糖尿病肾病的发生、发展中起了重要作用,它参与细胞外基质纤维化等诸多生理病理过程。通络方剂(Tong luo Recipe,TLR)是根据中医络病学理论研制而成的复方制剂,由人参、水蛭、全蝎、蜈蚣、土鳖虫和赤芍等药物组成,本课题组前期研究表明,其对糖尿病肾病具有保护作用,在糖尿病大鼠肾脏中,可以通过抑制RAS系统、抗氧化、改善血管内皮细胞功能等机制发挥作用。然而,通络方剂对糖尿病肾脏纤维连接蛋白(FN)的影响,目前尚无相关报道。本实验使用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型,观察TLR对糖尿病大鼠肾脏P38MAPK-FN通路相关蛋白及其病理结构的影响,进一步探讨TLR对糖尿病肾脏保护作用的可能机制。本研究通过自动化生化分析仪检测正常对照组、糖尿病组、通络方剂干预组大鼠血糖、血尿素氮、血肌酐、左肾重/体重、24小时尿蛋白、尿蛋白/肌酐比;肾皮质PAS染色;电镜观察肾小球基底膜;蛋白质印迹分析检测t-p38MAPK,p-p38MAPK,t-CREB(环腺苷酸反应元件结合蛋白,CAMP response element binding protein),P-CREB,FN(纤维连接蛋白)蛋白表达情况,发现糖尿病组大鼠肾功能损害明显,肾小球增大,系膜增生,p-p38MAPK,P-CREB,FN蛋白表达明显增加,通络方剂干预后,明显改善肾功能,下调p-p38MAPK,P-CREB,FN蛋白的表达。通络方剂可能通过抑制p38MAPK- FN信号通路,对糖尿病肾病大鼠肾功能产生保护作用。目的:研究TLR对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏p38MAPK-FN信号转导通路的影响,探讨TLR对糖尿病肾脏保护作用的可能机制。方法:研究对象:健康、无特定病原体(SPF)级SD大鼠。CON对照组(N=7),糖尿病未干预组DM(N=7)和糖尿病通络方剂组DM+TLR(N=7)。第一部分:采用全自动生化分析仪检测大鼠静脉空腹血糖、血尿素氮、血肌酐,尿肌酐,放射免疫法检测24小时尿蛋白。肾皮质PAS染色。电镜观察肾小球基底膜。第二部分:蛋白质印迹分析检测肾皮质组织中t-p38MAPK,p-p38MAPK,t-CREB(环腺苷酸反应元件结合蛋白,CAMP response element binding protein),P-CREB,FN的蛋白表达。结果:1.一般情况:大鼠注射STZ 1周后,尾静脉采血测血糖>16.7mmol/L,可确定糖尿病模型制备成功,造模成功率86.7%。此后每周监测血糖1次,血糖均维持在l6.7 mmol/L以上,模型稳定性良好。大鼠注射STZ后36～48 h出现多饮、多尿,第3～4天多食明显,精神不振,毛发干枯,光泽度下降,“三多一少”症状典型。CON组大鼠饮食、饮水、尿量正常,毛发光亮,体质量自然增加。经通络方剂治疗后,糖尿病大鼠反应灵敏,毛发光泽度有所增加,“三多一少”症状减轻。2.大鼠生化指标与CON组相比,DM组大鼠平均左肾重/体重比、血糖、血尿素氮、肌酐、24小时尿蛋白、尿蛋白/肌酐显著增加(p<0.05)。与DM组相比,DM +TLR组除血糖、尿素氮之外,这些参数是显著降低(p<0.05)。3.肾皮质PAS染色DM组与DM +TLR组,可以看到肾小球增大,系膜基质增生,CON组未显示。与DM组相比,DM +TLR组大鼠基质、系膜增生较少。4.电镜观察肾小球基底膜DM组与DM +TLR组,可以看到肾小球基底膜增厚,CON组未显示。与DM组相比,DM +TLR组大鼠肾小球基底膜增厚较少。5.肾皮质t-p38,p-p38,t-CREB,P-CREB,FN水平与CON组相比,DM组t-p38, t-CREB没有改变(p>0.05),p-p38增加2.37(p<0.05),p- CREB增加2.21(p<0.05),FN增加2.03(p<0.05);与DM组相比,DM +TLR组显著降低p-p38,p- CREB, FN(p<0.05);对t-p38,t-CREB没有改变(p>0.05)。结论:通络方剂可能通过抑制p38-FN通路,对糖尿病肾病大鼠产生保护作用。