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本课题主要探讨Th1型细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-2的含量与胚胎移植受胎率的相关性;研究NO在胚胎附植、发育中的作用及其与细胞因子的相互关系;应用中药“安胎散”促孕保胎,临床验证其提高胚胎移植受胎率的效果,并初步研究其作用机理。本试验以胚胎移植技术为依托,采集胚胎移植当日供体羊和受体羊子宫液、血样,两个情期时采集受体羊血样,ELISA方法检测细胞因子的含量,硝酸还原酶法检测NO的含量。结果显示,无论山羊还是绵羊,返情的受体羊胚胎移植当日子宫液或血浆中Th1型细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2的含量显著高于受胎羊和供体羊(P<0.05),而受胎羊胚胎移植当日子宫液或血浆中Th1型细胞因子与供体羊比较无显著差异性(P>0.05)。表明Th1型细胞因子的过度表达,不利于胚胎着床和发育;供、受体羊子宫内环境免疫状态的一致性是胚胎植入受体羊后正常发育的重要条件。山羊受体受胎羊两情期时血浆中的Th1型细胞因子含量低于胚胎移植当日血浆中的Th1细胞因子含量,但差异不显著(P>0.05),说明随妊娠的进行,Th1型细胞因子水平有所降低,有利于妊娠的进行。山羊和绵羊返情羊胚胎移植当日血浆中NO含量显著高于受胎羊(P<0.05),提示NO的过度表达,有害于植入的胚胎正常发育,导致胚胎早期丢失。胚胎移植当日山羊受体受胎羊和返情羊血浆中NO含量和各细胞因子含量变化基本一致(图2-1),说明Th1型细胞因子含量和NO含量相互之间有关系。通过研究我们还发现,受胎羊妊娠40天时血浆中NO含量显著高于胚胎移植当日,却极显著低于同时期的返情羊(P<0.01),表明随妊娠的发展,NO含量升高是胚胎生长发育的需要,有助于胚胎生长发育,属正常生理现象。 胚胎移植后,将20只受体山羊随机分为中药组和对照组,每组10只;14只受体绵羊也随机分为中药组和对照组,每组7只。于手术后第2日起,将中药“安胎散”添加入精料中饲喂,每只羊每天100g,连用三天。之后,在第7天和第10天以同样剂量和方法再各喂一次。对照组不用药,在相同饲养管理条件下,于40天时统计两组受体羊的两情期受胎率,同时颈静脉采集试验羊血样,检测血浆中Th1细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-2和NO的含量。结果中药组受体羊两个情期后受胎率山羊为90%,绵羊为85.7%,对照组分别为60%和57.1%,经x~2检验,中药组受胎率极显著高于对照组受胎率(P<0.01),表明中药“安胎散”具有较好的保胎效果,用于胚胎移植后的受体羊,可显著提高受胎率。并且对山羊的效果要优于对绵羊的效果,但差异不显著(P>0.05)。中药组血浆中各细胞因子含量显著低于对照组(P<0.05),NO含量山羊中药组极显著低于对照组(P<0.01),绵羊中药组NO含量显著低于对照组(P<0.05),表明“安胎散”应用于移植胚胎后的受体羊,可抑制Th1反应,下调Th1细胞因子的含量;抑制NO的过度合成,利于妊娠的生理过程。