第一部分胃癌细胞与腹膜间皮相互作用促进腹膜纤维化、腹膜转移的研究胃癌是我国发病率和死亡率较高的恶性肿瘤之一,腹膜转移是导致患者术后死亡的重要原因。正常的腹膜是由单层间皮细胞及其下方的细胞外基质组成,能够防止肿瘤细胞对于腹膜的粘附。对于癌细胞是如何突破完整连续的间皮细胞进而进行腹膜种植的,目前认为早在癌细胞黏附于腹膜之前,腹膜就已经发生了改变。其中腹膜纤维化是重要的表现形式之一。在本文中我们研究了间皮细胞对胃癌细胞的抵御作用,模拟了游离癌细胞在接触腹膜前通过其分泌物导致的腹膜增厚、纤维化的过程,同时观察了间皮细胞对胃癌细胞迁移及侵袭能力的反作用。方法：用荧光显微镜观察共培养时间皮细胞对胃癌细胞的抵御作用；向小鼠腹腔分次注入胃癌分泌上清,4周后HE染色、Masson染色、电镜观察腹膜变化；电镜、光镜下观察体外实验中间皮层在胃癌-腹膜相互作用中的损伤和细胞骨架变化；采用Millicell小室共培养观察间皮细胞对胃癌细胞迁移及侵袭能力的反作用。结果：完整的间皮层能够防止肿瘤细胞对于腹膜的粘附。但在间皮细胞损伤脱落以后,胃癌细胞轻易粘附在间皮脱落所形成的裸区。动物实验显示：接触胃癌细胞上清后腹膜间皮细胞变为圆形、柱形,间皮细胞脱落,有大量纤维素样物质沉积。在体外实验中间皮细胞微绒毛倒伏、断裂、脱失,细胞呈梭形改变,细胞骨架重构,与体内情况一致；间皮细胞在胃癌转移过程中并不仅仅是“受害者”,还可以是“主动参与者”。胃癌细胞诱导损伤间皮后,受损残余的间皮可以反作用于癌细胞,使其迁移转移力提高。结论：(1)正常间皮细胞可以抵御胃癌细胞的侵袭,保护腹膜。(2)胃癌细胞可以通过其分泌物诱导腹膜纤维化。(3)受损伤刺激后的间皮细胞可以反作用于胃癌细胞促进其迁移及侵袭。第二部分胃癌腹膜转移早期腹膜间皮细胞损伤与凋亡的研究腹膜转移是进展期胃癌根治术后最常见的复发形式,是胃癌患者的主要死亡原因。胃癌细胞诱导腹膜间皮细胞的损伤改变很可能与细胞凋亡相关。本研究目的：建立胃癌腹膜转移早期间皮细胞的损伤模型,确定胃癌腹膜转移早期癌细胞对间皮细胞的损伤与细胞凋亡的联系,并探讨凋亡程度及相关蛋白表达。方法：收集处理人胃癌细胞分泌的上清,与人腹膜间皮细胞系HMrSV5共培养。观察间皮细胞形态、增殖改变,透射电镜确认细胞凋亡,流式细胞仪和荧光染色判断凋亡比例。免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达情况。结果：接触胃癌上清24h后,间皮细胞受损脱落,出现大片裸区。胃癌细胞的分泌物明显的抑制了间皮细胞的生长,而正常胃粘膜细胞系GES-1不能对间皮细胞构成损伤。电镜下胃癌细胞上清处理后细胞膨胀变圆,染色质高度凝聚,核膜皱缩,但完整。内质网膨胀。边缘化浓缩呈境界分明的细小团块状沿核膜内侧排列,部分细胞核解体,核仁消失,胞膜下陷,形成由质膜包裹内含完整的细胞器、核碎片等细胞内容物的凋亡小体,证实了细胞凋亡的存在。胃癌细胞上清诱导了间皮细胞凋亡抑制细胞增殖,并且程度与时间呈正相关。胃癌细胞的上清能明显抑制间皮细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达；并能增加促凋亡蛋白Bax的表达。Bcl-2和Bax的失调最终导致间皮细胞凋亡。结论：胃癌细胞在腹膜转移早期可以通过其分泌物诱导间皮细胞损伤、凋亡,凋亡机制与Bcl-2和Bax的失调有关。提示保护间皮细胞,抗间皮细胞凋亡在胃癌腹膜转移治疗中可能有一定应用价值。第三部分腹腔中由旁分泌和／或自分泌的TGF—β1影响腹膜间皮形态与功能进而促进癌转移的研究人腹膜表面的间皮层可以抵御癌细胞的转移。我们认为：侵透浆膜的胃癌,脱落形成腹腔游离癌细胞,癌细胞释放多种炎性介质,在癌细胞粘附到腹膜之前,诱导了间皮细胞损伤,进而脱落,导致间皮下结构暴露,形成裸区,这种损伤的腹膜为癌细胞粘附种植提供了“土壤”。我们之前报道胃癌可以诱导间皮细胞凋亡,从而破坏间皮层,促进胃癌腹膜转移。在本文中我们研究了TGF-β1对胃癌-腹膜相互作用的影响。方法：我们采用ELISA检测了胃癌分泌上清中的相关细胞因子的含量,以及在胃癌-腹膜相互作用中smad 2,3和磷酸化smad 2,3的水平。我们把人腹膜间皮细胞系HMrSV5分别与TGF-β1、胃癌上清+TGF-β1抑制剂SB431542共培养,观察了间皮的形态学变化,通过流式细胞术和荧光染色检测凋亡,评估了TGF-β1对胃癌粘附力的影响。结果：在本研究中我们观察到,5种胃癌细胞系均能分泌大量的TGF-β1,TGF-β1的分泌量明显多于其他细胞因子。用western进一步证实了TGF-β1及其信号通路TGF-β1/smad 2,3确实参与了胃癌对间皮的损伤。TGF-β和胃癌上清均能破坏间皮层,致损伤脱落,胃癌细胞和TGF-β1能明显影响间皮细胞生长。由于间皮细胞和胃癌细胞均能分泌TGF-β1,所以TGF-β1可以通过自分泌和旁分泌两种途径损伤间皮。我们还发现使用TGF-β1抑制剂SB431542抑制环境中TGF-β1与间皮上的受体结合能够在一定程度上保护腹膜。从正反两方面说明了TGF-β1在胃癌腹膜转移中的重要作用。结论：在腹腔中存在的诸多细胞因子中,由旁分泌和／或自分泌的TGF-β1影响了腹膜间皮形态与功能进而促进了癌转移。