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[目的]血液系统疾病,尤其是恶性血液病患者由于其自身免疫功能缺陷及反复化疗所致骨髓抑制、中性粒细胞缺乏等,极易出现院内感染,尤其是肺部感染,包括细菌性肺炎、真菌性肺炎、细菌合并真菌及病毒感染等。其中,肺泡巨噬细胞(Alveolarmacrophages,AMs)是聚居在肺泡表面对维持肺泡表面活性物质平衡起重要作用,参与肺泡壁上气液交换,防止肺泡塌陷,还可以通过吞噬功能消除吸入的病原体、粉尘微粒子。研究证明,AMs缺乏时,引起AMs介导的固有免疫损伤,导致肺部感染增加,表明AMs在防御肺部感染中起着重要的作用。因此,研究肺部AMs对防治肺部感染非常重要。结节硬化复合物1(Tuberous sclerosis complex 1,Tsc1)和结节硬化复合物2(Tuberous sclerosis complex 2,Tsc2)结合形成一个复合物,该复合物可以通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白1(Mammalian target of rapamycin complex 1,mTORC1)调节细胞的代谢和能量的稳定。研究表明Tsc1基因参与腹腔巨噬细胞M1/M2的极化,并通过控制极化预防炎性疾病的发生,是维持腹腔巨噬细胞生长和功能的重要因子;但目前关于Tsc1基因在AMs中的影响及功能尚无报道。本研究通过Tsc1基因条件性敲除小鼠,研究Tsc1对AMs的分化、生存、增殖、吞噬功能等的影响。[方法]首先取C57小鼠肺组织及肺泡灌洗液,流式细胞术分析CDllc+细胞占F4/80+CD68+细胞的比例,证实AMs高表达CDllc;为了研究Tsc1在AMs中的作用,将由CD1 lc启动子控制表达Cre重组酶的Cdllccre小鼠与Tsc1fl/fl小鼠杂交获得CDllc+细胞中特异性Tsc1条件性敲除鼠(CdllccreTsc1fl/fl);采用琼脂糖凝胶电泳和Western blot分别从基因和蛋白水平定性分析基因Tsc1的敲除情况;为了探索Tsc1敲除后对AMs表型的影响,取Tsc1fl/fl和CdllccreTsc1fl/fl鼠肺组织及肺泡灌洗液,制成单细胞悬浮液,利用流式细胞术分析肺组织及肺泡灌洗液内AMs的比例和表面特异性标记物。同时利用流式细胞术分析新出生和出生后7天的Tsc1fl/fl和CdllccreTsc1fl/fl小鼠肺组织单核细胞至成熟AMs的发育情况。为了研究增殖和凋亡是否参与AMs数量的改变,利用流式细胞术和凋亡检测试剂盒分别检测Tsc1fl/fl和CdllCreTsc1fk/fl小鼠AMs的增殖及凋亡情况。最后使用Vybran TM phagocytosis assay kit试剂盒和活性氧指示剂合并流式细胞术检测AMs的吞噬功能和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生。[结果]肺泡灌洗液和肺组织CDllc+细胞占F4/80+CD68+细胞的比例为(83.2±4.3)%和(71.5±5.8)%。通过琼脂糖浆电泳和Western blot检测发现Tsc1蛋白在CdllcCreTsc1fl/fl小鼠AMs中不表达。CdllccreTsc1fl/fl小鼠肺泡灌洗液及肺组织中AMs比例和数量显著下降,同时其细胞表面特异性标志物CD64和SiglecF在CdllccreTsc1fl/fl小鼠AMs中表达也下调。在研究小鼠AMs的发育时,我们发现出生后7天CdllcCreTsc1fl/flf小鼠肺组织AMs的比例下降,但是新出生小鼠没有明显变化,同时新出生和出生后7天Tsc1fl/fl和CdllccreTsc1fl/fl和小鼠肺组织中单核细胞和前体肺泡巨噬细胞无明显差异。另外,cdllccreTsc1fl/fl对比Tsc1fl/fl小鼠体内成熟AMs的凋亡无变化,但是其增殖标记物Ki67的表达增加。最后我们发现CdllccreTsc1fl/fl小鼠的吞噬功能和ROS的产生增加。[结论]1.AMs特异性高表达CDllc;2.Tsc1维持AMs数量的稳定,但对AMs的凋亡无影响,并抑制其增殖能力;3.Tsc1蛋白在AMs发育过程中起重要作用;4.Tsc1抑制AMs的吞噬功能和ROS的产生。