【摘 要】
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柠檬烯是一种无色有强烈宜人香味的环状单萜,不仅可以直接用作香精香料,还可以作为前体物质生产生物燃料、某些芳香剂和药物。柠檬烯作为一种天然产物,拥有巨大的商业价值。
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柠檬烯是一种无色有强烈宜人香味的环状单萜,不仅可以直接用作香精香料,还可以作为前体物质生产生物燃料、某些芳香剂和药物。柠檬烯作为一种天然产物,拥有巨大的商业价值。从植物组织中提取这些宝贵的天然产物存在着含量低等缺点,因此,利用大肠杆菌等微生物生产天然产物的研究引起了越来越多科学家们的关注。本研究以大肠杆菌为底盘细胞,将柠檬烯合成所需的两个外源基因导入其中,得到一条(-)-柠檬烯生物合成途径。通过对外源基因的选择和基因表达的优化,得到一株表达质粒p15T7-ls-gpps的大肠杆菌工程菌株,其柠檬烯产量达到4.87mg/L,产率(Yp/x)为0.863mg/gDcw (48h)。为增强大肠杆菌的柠檬烯合成能力,我们把为柠檬烯合成提供前体的MEP途径两个最重要的限速酶基因dxs和idi的表达做了强化,得到的工程菌柠檬烯产量为17.4mg/L,产率(Yp/x)为2.89mg/gDcw的柠檬烯。最后,我们对由培养基和正十六烷组成的双相培养系统进行了优化,确定了其中有机相的体积比以及培养基的组分。优化后大肠杆菌工程菌株的柠檬烯产量达32.5mg/L,产率(Yp/x)为5.59mg/gDcwo
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