目的：大肠杆菌O157：H7已成为威胁人类健康的重要致病菌之一。由于其致病力强、感染剂量低、潜伏期长,使得对传染源的控制、监测和追踪成为难题。因此,建立快速、简便、灵敏度高和特异性强的检测方法对于食品安全的筛查、诊断、治疗、监测和控制具有重要的意义。方法：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,通过紫外分光光度计、透射电镜分析和观察表征和形貌。在胶体金上标记大肠杆菌O157：H7单克隆抗体,并测定最小标记浓度和最适pH值。将纯化后胶体金标记抗体点样在玻璃纤维膜上,以大肠杆菌O157：H7单克隆抗体和兔抗鼠IgG包被于硝酸纤维膜上,成为检测线(T线)和质控线(C线),采用双抗体夹心法,制备成大肠杆菌O157：H7胶体金免疫层析试纸条。对试纸条各项指标进行优化,确定了最佳抗体包被浓度和金标抗体缓冲液稀释倍数。并对不同浓度的大肠杆菌O157：H7菌悬液进行检测,观察该方法的灵敏度、特异性、重复性和稳定性。将胶体金免疫层析法与免疫磁分离技术结合,对大肠杆菌O157：H7进行快速检测。磁珠包被羊抗鼠IgG再与大肠杆菌O157：H7单克隆抗体偶联,制成免疫磁珠。以该免疫磁珠捕获富集样本中的大肠杆菌O157：H7,再将富集出来的大肠杆菌O157：H7与免疫磁珠分离,对分离重悬后的菌悬液进行胶体金免疫层析试纸条的检测,评价富集后检测的灵敏度、特异性。利用建立的免疫磁性分离与胶体金免疫层析法制备大肠杆菌O157：H7检测试剂盒对150份模拟食品样本(包括牛奶、纯净水和牛肉)进行检测,并与传统的金标准方法进行比较,以评价此方法符合率和优缺点。结果：成功制备了20nm的胶体金,平均直径为20±3nm,颗粒大小均匀,形状规则,分散性好。胶体金标记抗体最佳pH值为8.0,最佳标记蛋白量为16.8μg／ml。胶体金标记抗体最适稀释度为1：1,T线为1mg/ml, C线为5mg／ml条件下效果最佳,5min左右显示清晰的条带。用胶体金免疫层析试纸条检测纯大肠杆菌O157：H7菌悬液时,检测灵敏度为105CFU／ml,特异性好,稳定性和重复性佳。当胶体金免疫层析试纸条结合免疫磁性分离技术检测纯大肠杆菌O157：H7菌悬液时,检测灵敏度可达103CFU／ml,特异性相似；在模拟食品样本检测中,与金标准方法检测结果一致,具有较好的吻合度。结论：成功研制了大肠杆菌O157：H7胶体金免疫层析试纸条,该试纸条具有灵敏度高、特异性好、检测速度快、操作简便等优点,可用于现场大量样品的初筛。另外,成功建立的胶体金免疫层析试纸条结合免疫磁珠分离技术检测大肠杆菌O157：H7方法,检测的灵敏度提高了两个数量级,特异性相似。对于商检、海关、出入境等食品管理的现场筛查、监控和控制具有重要的社会意义和经济效益。