本研究探讨受DNA甲基化调控的长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)在原发性肝癌发生中的潜在功能及作用机制。　　 对于原发性肝癌发生的复杂机制已有大量的研究报道。长期以来，人们普遍认为遗传学上的基因突变是肝癌发病机制中的关键，尤其是原癌基因的激活及抑癌基因的体细胞突变与肝癌的发生有着密切关系。但是，近年来随着对肝癌研究的深入，人们发现表观遗传学异常在肝癌的发生、发展过程中也发挥着非常重要的作用。由遗传学和表观遗传学改变所引起的原癌基因的激活及抑癌基因的失活共同导致了细胞的恶性病变，而表观遗传学改变甚至早于遗传学改变，在肝癌前期即开始出现。在已知的表观遗传修饰类型中，DNA甲基化和长链非编码RNAs是两种重要的表观遗传修饰类型，其中DNA甲基化是了解较多的表观遗传学修饰之一。在肝癌早期所发生的原癌基因的低甲基化和抑癌基因的高甲基化被普遍认为是肝癌发生、发展的重要机制之一。而lncRNAs是一类转录本长度超过200nt的RNA分子，可以通过各种不同的机制调控基因的转录及表达，并参与基因组印记及染色质修饰、转录激活、转录后调控、蛋白功能调节等多种重要的信号转导过程。但是，目前已知确切功能的lncRNAs数量极少，对肝癌发生相关lncRNAs的了解则更加有限。根据现有对表观遗传修饰及其调控机制的推测，不同的表观遗传学修饰间是相互关联、相互影响的，多重组分共同构成了完整的表观遗传学调控网络。那么DNA甲基化的异常改变是否是lncRNAs表达受控的上游环节，并能够通过影响lncRNAs的表达来参与肝癌的发生呢？　　 本研究中我们尝试找到受DNA甲基化修饰调控并与肝癌发生密切相关的lncRNAs，并研究其功能与作用机制。我们首先对经去甲基化处理的肝相关细胞样品所获得的lncRNAs表达谱芯片数据进行分析，以表达量差异两倍以上、启动子区含CpG岛、人鼠同源性高等原则初步筛选出一系列的lncRNAs，然后在多种肝细胞系、肝癌细胞系及肿瘤样本癌与癌旁组织中对这些候选lncRNAs进行了RNA水平表达量的检测，继而对其进行了相应位点的DNA甲基化水平检测，选取表达量改变符合芯片数据，且DNA甲基化改变差异明显的lncRNAs作为候选分子。其中，经DAC(5-杂氮胞苷)去甲基化处理后，启动子区DNA甲基化水平变化显著的lncRNA-AY927547在肝癌细胞系及肝癌组织中的RNA表达量发生明显下调。为了进一步分析该lncRNA与肿瘤表型的潜在关联，我们对lncRNA-AY927547分别进行了RNA干扰及过表达，在体外细胞水平对其在增殖、迁移及凋亡上发挥的功能进行了进一步验证，结果显示lncRNA-AY927547能够抑制肿瘤细胞的增殖与迁移。我们继而对lncRNA-AY927547的作用机制进行了研究，利用RNA-pulldown技术发现lncRNA-AY927547能与M2型丙酮酸激酶(M2 isoform of pyruvate kinase， PKM2)发生结合，进一步的RNA免疫沉淀实验证实了其结合的特异性。在此基础上，研究发现lncRNA-AY927547能够通过影响PKM2的活性参与对肝癌增殖的影响。　　 我们的研究证明了受到DNA甲基化异常调控的lncRNA-AY927547在原发性肝癌发生发展过程中发挥重要作用，且起到抑癌基因的作用，为丰富不同表观遗传学修饰之间的相互调控机制及理解表观遗传学的复杂调控网络起到了积极的作用。该研究也为肝癌发生作用机制提供了新思路，使我们更好地理解原发性肝癌的发生机制，并为肝癌的早期诊断，改善治疗提供了可能性。