乙型肝炎病毒表面抗原在人卵母细胞和早期胚胎中的表达

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研究背景:乙型肝炎病毒感染是一个全球性健康问题,主要流形于亚洲、非洲、南部欧洲和拉丁美洲,全球有20亿人有既往或持续感染乙肝的血清学证据,全球有约3.5亿的慢性HBV感染者,乙型肝炎病毒与急慢性肝炎、肝硬化、肝癌的发生发展密切相关,其中约15~25%要死于HBV相关的终末期肝硬化和肝癌,每年>100万死于急慢性HBV感染,中国有1.7亿的HBV慢性感染者。HBV主要通过血液、母婴传播、性接触传播和密切生活接触等途径引起传播,国内的慢性HBsAg携带者中约有40%是通过母婴传播所致,部份婴儿在宫内即受到HBV感染,宫内感染率为5~10%,垂直传播是我国HBV感染的重要形式。广义的垂直传播是指母婴或父婴间的传播。而真正意义上的垂直传播是指病毒感染患者的生殖细胞,在受精时由精子或卵细胞作为载体,经受精卵将病毒基因带到胚胎进而使子代患病。按性别划分,垂直传播又分为父婴垂直传播和母婴垂直传播。以人精子为载体传播已有较多的研究,而通过人卵母细胞传播却很难开展,主要是因为卵母细胞获取太难,至今未见人类着床前早期胚胎HBV研究的报道。但在动物实验中已有较多的研究证明HBV可以通过卵母细胞传递至子代。研究目的:本研究拟在先前的实验已证实HBVDNA在卵母细胞及早期胚胎中存在的基础上,采用免疫荧光方法检测卵母细胞和早期胚胎内HBsAg的表达,以进一步证实HBV对卵母细胞的感染及其转录活性,为研究HBV是否通过卵母细胞及精子传递至子代提供直接证据。材料与方法:实验组:卵母细胞:需要ⅣF的妇女为HBV携带者手术后未受精的卵母细胞,19个。早期胚胎:同期进行ⅣF的夫妻双方任一方为HBV携带者手术后废弃的早期胚胎,56个。阴性对照:同期进行ⅣF的夫妻双方均不是HBV携带者手术后未受精的卵母细胞9个及废弃的早期胚胎19个。阳性对照:HBV感染的肝癌细胞系。用免疫荧光法检测卵母细胞及早期胚胎中HBsAg的表达。结果:在实验组的人卵母细胞(2个)及早期胚胎中(3个)可以检测到FITC的阳性信号,阳性率分别是10.5%和5.4%,而在阴性对照组中未检测到。FITC荧光在卵母细胞中的表达量不尽一致,胚胎中有单个细胞的单一表达,有单个细胞的多点表达,也有一个胚胎中多个细胞的多点表达。结论:HbsAg在人卵母细胞及早期胚胎中有表达,HBsAg的表达量并不一致,HBV能够以卵母细胞及精子载体传递至子代。
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