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1目的观察强直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis,AS)患者免疫球蛋白亚型和细胞自噬的变化及具有益气健脾、除痹化湿功效的中药新风胶囊(Xin Feng Capsule,XFC)对AS患者免疫球蛋白亚型和细胞自噬相关指标的影响,研究XFC对上述指标的作用机制。2方法2.1通过大量的文献研究,分析AS免疫球蛋白亚型和细胞自噬变化与中医脾虚的关系,总结其中医学病因病机,根基从脾论治的中医理论阐释AS免疫球蛋白亚型和细胞自噬变化的依据。2.2强直性脊柱炎患者免疫球蛋白亚型和细胞自噬的变化及其相关性研究:采用ELISA试剂盒检测细胞因子(Interleukin 4,IL-4),(Interleukin 6,IL-6),(Interleukin 8,IL-8),(Interleukin 10,IL-10);免疫球蛋白(Immunoglobulin G1,Ig G1)、(Immunoglobulin G2,Ig G2)、(Immunoglobulin G3,Ig G3)、(Immunoglobulin G4,Ig G4)、(Immunoglobulin A,Ig A)、(Secretory Immunoglobulin A,SIg A)、(Immunoglobulin M,Ig M);采用Western-blot检测淋巴细胞自噬蛋白Beclin1、自噬指标微管相关蛋白l轻链(LC3-II)、(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、(Protein Kinase B,AKT)、(mammalian target of rapamycin,m TOR);采用PCR方法检查血清自噬相关基因:(Autophagy-related gene 1,Atg1)、(Autophagy-related gene 5,Atg5)、(Autophagy-related gene 12,Atg12)、(Autophagy-related gene 13,Atg13)、(Autophagy-related gene 17,Atg17)。观察强直性脊柱炎疾病活动指数(bath ankylosng spondylitis disease active index,BASDAI);强直性脊柱炎功能指数(bath ankylosng spondylitis functional index,BASFI)。采用SPSS17.0统计软件分析上述指标及它们之间的相关性。2.3临床疗效研究2.3.1将39例AS患者作为研究组,对照组选取的是同一时期的31位健康体检者;比较两组的症状体征、细胞因子、免疫球蛋白亚型、自噬通路、自噬基因及相关指标的变化情况。2.3.2将60例AS患者按随机方法分为研究组和对照组,其中治疗组30例(中药新风胶囊+中医辨证论治+药物熏蒸),对照组30例(西药柳氮磺胺吡啶+中医辨证论治+药物熏蒸);比较两组疗效和治疗前后症状体征、细胞因子、免疫球蛋白亚型、自噬通路、自噬基因及相关指标的变化情况。3结果3.1理论研究结果3.1.1AS患者存在免疫球蛋白亚型和细胞自噬的变化AS患者存在免疫球蛋白亚型和细胞自噬的变化,免疫球蛋白亚型和细胞自噬的情况对AS患者的诊断、病情、预后均具有一定意义,因此加强对AS患者免疫球蛋白亚型和细胞自噬的研究,意义重大。3.1.2脾虚在AS患者的免疫球蛋白亚型和细胞自噬变化中具有重要意义脾胃为后天之本,是人体气血生化之源。脾土健运则人身正气不虚而百病不生,脾虚则气血亏虚,无以濡养周身,体表卫外不顾,自身免疫下降,易受外邪,而免疫球蛋白亚型和细胞自噬均与免疫相关,故脾虚在AS免疫球蛋白亚型和细胞自噬的变化中具有重要意义。3.2 AS免疫球蛋白亚型和细胞自噬的变化3.2.1 AS患者与健康对照组BASDAI、BASFI的变化两组BASDAI、BASFI的VAS评分差异显著(P<0.01)。3.2.2 AS患者与健康对照组IL-4、IL-6、IL-8、IL-10的变化AS患者IL-4、IL-10较健康对照组比较均显著降低(P<0.01),具有统计学意义,IL-6、IL-8较健康对照组比较均显著升高(P<0.01),有统计学意义。3.2.3 AS患者与健康对照组Ig G、Ig A、SIg A、Ig M的变化两组比较Ig G1、Ig G3、Ig A较健康对照明显升高,具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。两组Ig G2、Ig G4、SIg A、Ig M无明显差异。3.2.4 AS患者与健康对照组Beclin1、LC3-II、PI3K、AKT、m TOR的变化两组比较LC3-II、PI3K、AKT、m TOR较健康对照明显升高,具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。两组Beclin1无明显差异。3.2.5 AS患者与健康对照组ATG1、ATG5、ATG12、ATG13、ATG17的变化两组比较ATG1、ATG12、ATG13、ATG17较健康对照明显降低,ATG5较健康对照明显升高,具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。3.2.6 AS患者免疫球蛋白亚型、细胞自噬指标与各相关指标的相关性分析结果显示:AS患者IL-4、IL-10与BASDAI呈负相关,IL-6、IL-8与BASDAI、BASFI均无相关性;AS患者Ig G1、Ig G3与BASDAI、BASFI呈正相关;AS患者IL-6、IL-8与Ig G1、Ig G2、Ig G3、Ig G4、Ig A、SIg A、Ig M呈正相关;Beclin1与PI3K、AKT、m TOR呈正相关,LC3-II与PI3K、AKT呈负相关;AS患者Beclin1、AKT、m TOR与Ig G1、Ig G2、Ig G3、Ig G4、Ig A、SIg A、Ig M与呈正相关;AS患者Ig G1、Ig G2、Ig G3、Ig A、SIg A、Ig M与ATG13呈正相关,与ATG17呈负相关。其他各指标间均无相关性。4临床疗效研究结果本研究表明:XFC组较SASP组更能改善治疗前后的BASDAI、BASFI,临床疗效优于对照组;与SASP组相比,XFC组IL-6较治疗前明显下降,IL-10较治疗前明显升高,XFC更能调节AS的细胞免疫,维持细胞免疫的平衡;与SASP组相比,XFC组Ig G1、Ig G3、Ig A较治疗前明显下降,XFC更能调节AS的免疫球蛋白亚型,调整体液;与SASP组相比,XFC组PI3K、AKT、m TOR较治疗前明显下降,XFC能抑制PI3K/Akt/m T0R信号通路;与SASP组相比,XFC组ATG1、ATG12、ATG13、ATG17,XFC显著升高,增强细胞自噬情况。5结论5.1 AS患者存在免疫球蛋白亚型和细胞自噬的变化。5.2脾虚在AS免疫球蛋白和细胞自噬的变化中有重要意义。5.3 AS患者免疫球蛋白亚型和细胞自噬的异常,表现为Ig G1、Ig G3、Ig A、PI3K、m TOR、ATG1、ATG5、ATG12、ATG13、ATG17的变化。且各指标直接存在一定的相关性:抑炎因子IL-4、IL-10与BASDAI呈负相关,至炎细胞因子IL-6、IL-8与免疫球蛋白各亚型呈正相关,免疫球蛋白亚型与PI3K、Akt、m T0R呈正相关,免疫球蛋白亚型与Atg17呈负相关。提示AS患者体内存在细胞免疫、体液免疫和细胞自噬的异常,细胞免疫与体液免疫,细胞免疫与细胞自噬,体液免疫与细胞自噬可能存在一定的关联,细胞免疫可能直接影响体液免疫和细胞自噬,体液免疫可能是通过PI3K/Akt/m TOR信号通路与细胞自噬相关。5.4 XFC组在改善症状体征、平衡细胞免疫、调节体液免疫、增强细胞自噬等方面均明显优于SASP组。5.5 XFC可能是通过下调致炎细胞因子、上调抑炎性指标水平,纠正细胞因子失衡状态;抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路活化,降低免疫球蛋白的表达,调节体液免疫状态;增强细胞自噬,维持机体内环境的稳定。