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目的：筛选与鉴定结直肠癌（colorectal cancer, CRC）奥沙利铂（oxaliplatin,L-OHP）耐药相关蛋白，为结直肠癌的个体化治疗提供分子标志物。方法：采用药物浓度递增的间隙诱导法建立结直肠癌奥沙利铂耐药细胞株HT-29/L-OHP，MTT法检测L-OHP对亲本细胞株HT-29和L-OHP耐药细胞株HT-29/L-OHP的IC50；提取细胞总蛋白，利用蛋白印迹法（Western blot）检测结直肠癌耐药细胞株HT-29/L-OHP中耐药相关蛋白的表达情况；采用二维凝胶电泳（two-dimensional gel electrophoresis,2-DE）和基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption-ionization time-of-flight tandem massspectrometry, MALDI-TOF/TOF）筛选并鉴定差异表达的蛋白质，并应用Westernblot对鉴定获得的部分蛋白进行验证。结果：（1）成功建立结直肠癌奥沙利铂耐药细胞株HT-29/L-OHP，MTT法检测结果显示，L-OHP对HT-29和HT-29/L-OHP细胞的IC50分别为（4.15±0.17）μg/ml和（32.01±1.87）μg/ml，有显著差异（P<0.05），耐药指数为7.71；（2）与亲本细胞株相比，耐药细胞株HT-29/L-OHP中耐药相关蛋白P-gp、MRP表达水平明显增加（P<0.05）；（3）结直肠癌细胞株HT-29和奥沙利铂耐药细胞株HT-29/L-OHP蛋白的二维凝胶电泳图谱分辨率高、重复性好，检测到的蛋白质点分别为2073±13、2077±18，其中表达水平差异2倍以上的蛋白质点有38个，经MALDI-TOF/TOF分析37个得到鉴定，其中上调的17个，下调的20个，生物信息学分析发现这些蛋白的功能涉及转录调节、细胞结构、细胞凋亡，能量代谢等多个方面；（4）蛋白质印迹法检测结果显示，多聚胞嘧啶结合蛋白1（polyC binding protein-1，PCBP1）、TUBB2A（tubulin，beta2A class Ⅱa）蛋白在HT-29/L-OHP细胞中表达水平上调，膜联蛋白A3（annexin A3，ANXA3）和磷酸化应激诱导蛋白（stress-induced phosphoprotein1，STIP1）则表达水平下调，与MALDI-TOF/TOF的研究结果相符。结论：PCBP1、TUBB2A、ANXA3和STIP1蛋白在HT-29细胞和HT-29/L-OHP细胞中的表达水平具有显著差异，可能是预测结直肠癌对奥沙利铂耐药的分子标志物，值得进一步研究。