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第一部分黄芩苷对ApoE-/-小鼠体内动脉粥样硬化斑块的干预作用目的：观察黄芩苷对ApoE-/-小鼠体内动脉粥样硬化斑块的干预作用。方法：6周龄雄性野生型C57BL/6J小鼠10只及6周龄雄性ApoE-/-小鼠20只,适应性喂养两周后分组干预。8周龄野生型C57BL/6J小鼠作为正常对照组,每日给予正常饲料和生理盐水灌胃；8周龄ApoE-/-小鼠随机分为两组：模型组(即高脂组,10只)及干预组(即黄芩苷组,10只)。模型组小鼠每日给予高脂饲料和生理盐水灌胃,干预组小鼠每日给予高脂饲料和黄芩苷100mg/kg/d灌胃。实验干预时间为12周,实验期间小鼠自由饮水取食。实验干预结束处死小鼠后分离心脏和胸腹主动脉,行主动脉窦部冰冻切片,采用油红O染色法检测动脉粥样硬化斑块。结果：高脂饲料喂养12周后,油红O染色可观察到正常组小鼠主动脉窦部血管壁无脂质斑块沉积,而模型组小鼠主动脉窦部血管壁附着大面积脂质斑块。与模型组比较,黄芩苷干预组小鼠主动脉窦斑块面积则明显减少。结论：黄芩苷干预高脂喂养的ApoE-/-小鼠能够显著抑制动脉粥样硬化斑块的形成。第二部分黄芩苷对ApoE-/-小鼠血脂水平和肝脏胆固醇代谢关键因子的作用研究目的：观察黄芩苷对ApoE-/-小鼠血脂水平和肝脏胆固醇代谢相关因子的作用。方法：6周龄雄性野生型C57BL/6J小鼠10只及6周龄雄性ApoE-/-小鼠20只,适应性喂养两周后分组干预。8周龄野生型C57BL/6J小鼠作为正常对照组,每日给予正常饲料和生理盐水灌胃；8周龄ApoE-/-小鼠随机分为两组：模型组(即高脂组,10只)及干预组(即黄芩苷组,10只)。模型组小鼠每日给予高脂饲料和生理盐水灌胃,干预组小鼠每日给予高脂饲料和黄芩苷100mg/kg/d灌胃。实验干预时间为12周,实验期间小鼠自由饮水取食。实验干预结束后禁食一晚,清晨经眶静脉取血分离血清,应用全自动生化分析仪检测各组小鼠血清脂质水平,包括总胆固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride, TG)、高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein cholesterol, HDL-C);低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol, LDL-C)水平则根据Friedewald公式算出。处死小鼠后分离肝脏,实时定量反转录PCR(Realtime reverse transcription PCR, Real time RT-PCR)技术检测羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶、低密度脂蛋白受体(LDLR)、前体蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)、肝X受体(LXR)、ATP结合盒转运子A1(ABCA1)和ATP结合盒转运子G1 (ABCG1)。结果：与正常组小鼠相比,模型组小鼠血清总胆固醇TC和低密度脂蛋白胆固醇LDL-C均显著高于正常组小鼠,而高密度脂蛋白胆固醇HDL-C水平则显著低于正常组小鼠；与模型组比较,黄芩苷干预组小鼠血清总胆固醇TC、低密度脂蛋白胆固醇LDL-C稍有降低但未达到统计学差异,其高密度脂蛋白胆固醇HDL-C水平无明显变化。三组小鼠血清甘油三酯水平无明显差异。高脂饲料喂养12周后,肝脏脂质代谢相关因子检测发现,与模型组比较,黄芩苷干预组小鼠肝脏HMG-CoA还原酶、LDLR和PCSK9 mRNA水平无明显变化,但LXR、ABCA1和ABCG1mRNA水平显著增加。结论：黄芩苷干预12周未降低高脂饲料喂养的ApoE-/-小鼠血清脂质水平,但能够显著上调部分促胆固醇流出的相关因子(LXR、ABCA1和ABCG1)的表达,这可能对黄芩苷抑制动脉粥样硬化斑块有一定促进作用。第三部分黄芩苷对ApoE-/-小鼠体内调节性T细胞数目和功能的作用研究目的：观察黄芩苷对ApoE-/-小鼠体内调节性T细胞数目和功能的影响。方法：6周龄雄性野生型C57BL/6J小鼠10只及6周龄雄性ApoE-/-小鼠20只,适应性喂养两周后分组干预。8周龄野生型C57BL/6J小鼠作为正常对照组,每日给予正常饲料和生理盐水灌胃；8周龄ApoE-/-小鼠随机分为两组：模型组(即高脂组,10只)及干预组(即黄芩苷组,10只)。模型组小鼠每日给予高脂饲料和生理盐水灌胃,干预组小鼠每日给予高脂饲料和黄芩苷100mg/kg/d灌胃。实验干预时间为12周,实验期间小鼠自由饮水取食。实验干预结束后禁食一晚,清晨经眶静脉取血分离血清,采用酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测血清中调节性T细胞(Regulatory T cells, Tregs)相关细胞因子：转化生长因子β(Transforming growth factor beta, TGF-β)和白介素10(Interleukin10, IL-10)。处死小鼠后分离脾脏、心脏和胸腹主动脉。新鲜脾脏分离出单个核细胞,将细胞密度调整至106cells/mL,用FITC标记的抗CD4抗体、APC标记的抗CD25抗体和PE/Cy5标记的抗Foxp3抗体标记Tregs,随后用流式细胞仪检测,流式软件分析Tregs细胞比例。胸腹主动脉则行Real time RT-PCR和免疫印迹(Western blot)检测Foxp3 mRNA和蛋白表达水平。心脏主动脉窦冰冻切片后利用抗Foxp3抗体行免疫组化染色。结果：与正常对照组小鼠比较,模型组小鼠脾脏Tregs的数目比例、主动脉Foxp3 mRNA和蛋白表达水平均增加；黄芩苷干预后ApoE-/-小鼠脾脏Tregs的比例、主动脉Foxp3mRNA和蛋白表达比模型组进一步增加。免疫组化检测斑块内Tregs,与正常对照组比较,模型组小鼠斑块内Tregs增加,而黄芩苷干预后斑块内Tregs数目比模型组进一步增加。ELISA检测发现模型组小鼠血清TGF-P和IL-10水平与正常对照组无统计学差异,而黄芩苷干预组小鼠血清TGF-p和IL-10水平显著增加。结论：黄芩苷干预ApoE-/-小鼠,能够在转录和翻译水平上调Foxp3表达,增加脾脏和斑块内的Tregs的数目,促进Tregs分泌抗炎因子TGF-β和IL-10。这是黄芩苷抑制斑块进展的重要机制。第四部分黄芩苷在翻译后水平对调节性T细胞特异性标志物Foxp3的作用研究目的：观察黄芩苷在翻译后水平对调节性T细胞特异性标志物Foxp3的影响。方法：6周龄雄性野生型C57BL/6J小鼠25只及6周龄雄性ApoE-/-小鼠40只,适应性喂养两周后分组干预。8周龄野生型C57BL/6J小鼠作为正常对照组,每日给予正常饲料和生理盐水灌胃；8周龄ApoE-/-小鼠随机分为两组：模型组(即高脂组,25只)及干预组(即黄芩苷组,15只)。模型组小鼠每日给予高脂饲料和生理盐水灌胃,干预组小鼠每日给予高脂饲料和黄芩苷100mg/kg/d灌胃。实验干预时间为12周,实验期间小鼠自由饮水取食。分别在8、12、16和20周龄末,采用Real time RT-PCR检测正常对照组和模型组小鼠主动脉组蛋白去乙酰化酶9(Histone deacetylase 9, HDAC9)和]HDAC6 mRNA变化趋势；且在实验末期对比三组小鼠主动脉HDAC9和HDAC6的mRNA和蛋白水平。实验干预结束处死小鼠后分离脾脏、心脏和胸腹主动脉。新鲜脾脏分离出单个核细胞,采用免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)和Western blot检测Foxp3蛋白乙酰化水平。心脏主动脉窦部冰冻切片后行免疫荧光(Immunofluorescence, IF)双染,检测主动脉Foxp3乙酰化水平。结果：与正常对照组小鼠比较,模型组小鼠主动脉HDAC9和HDAC6mRNA表达呈现持续上升状态,且在实验中后期显著高于正常对照组小鼠。黄芩苷干预后显著降低HDAC9和]HDAC6mRNA和蛋白表达。免疫沉淀和免疫荧光检测均发现模型组小鼠Foxp3乙酰化水平显著低于正常对照组,而黄芩苷干预能够显著增加Foxp3乙酰化水平。结论：黄芩苷干预高脂喂养的ApoE-/-小鼠,能够部分通过下调HDAC9和HDAC6的表达而在翻译后水平促进Foxp3乙酰化。