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本文以斜纹夜蛾离体培养细胞系SL-1和草地贪夜蛾离体培养细胞系Sf9为供试生物试材，系统研究了鱼藤酮对SL-1和Sf9的细胞毒性和作用方式，对细胞膜通透性的刺激作用，相关关键酶活性的动态变化，重点研究了鱼藤酮对细胞膜的破坏作用，为全面阐明鱼藤酮呼吸抑制作用分子机制提供了新证据和新角度，也为植物源杀虫剂的作用机制研究提供参考，具有理论指导意义。主要研究结果如下：
1.测定了鱼藤酮对SL-1和Sf9细胞生长曲线的影响，明确了对其的毒力大小。采用台盼兰法测定了鱼藤酮对SL-1和Sf9细胞生长曲线的影响，处理浓度为0.05-50μg/mL时，可明显抑制细胞的分裂生长，且具有明显的剂量依赖性。MTT法测定结果表明，处理后2、12、24、36、48h，鱼藤酮对SL-1的LC50值分别为39.42、32.16、25.33、16.88、11.29μg/mL，对Sf9的LC50值分别为41.22、34.90、39.35、19.40、14.05μg/mL；鱼藤酮终浓度为0.05、0.5、1.0、10、50μg/mL时，对SL-1的LT50分别为18.19、14.95、10.76、6.92、4.53h，对Sf9的LT50分别为21.03、17.59、12.93、8.51、6.13h，鱼藤酮对SL-1和SF9细胞均有较强的细胞毒性。
2.运用形态观察和生化检测手段明确了鱼藤酮对SL-1和Sf9的作用方式。以0.01-100μg/mL范围内共13个浓度梯度鱼藤酮处理SL-1和Sf9，结果表明，随着浓度的增加或/和时间的延长，胞内出现大量空泡，细胞破碎，甚至细胞不贴壁，大量漂浮死亡，无明显大量凋亡小体出现；荧光显微镜观察结果表明，当鱼藤酮0.05、0.5、1.0、10、50μg/mL处理后细胞经Hoechest 33258染色细胞染色均匀，强度均高于CK，随着处理浓度的升高和处理时间的延长，漂浮细胞增多，被染细胞明显减少，未观察到细胞染色质明显边缘聚集高亮点，AO染色细胞内部为均匀暗绿色，未见明显大量出现大小不一的绿色亮点细胞。
扫描电镜观察细胞结果表明，鱼藤酮1、10μg/mL处理SL-1和Sf9细胞，细胞表面出现了不同程度的凹陷、褶皱或空腔，细胞膜结构显著破坏，随着药物浓度的增大，处理时间的延长，细胞呈现出逐渐干瘪和萎缩的趋势；透射电镜观察显示，细胞外微绒毛消失，细胞膜和细胞质出现了自溶的现象，细胞核变形，体积明显增大，核内染色质的分散，胞内出现大量空泡，细胞质线粒体肿胀，内质网结构松散，未见明显的凋亡小体。
DNA Laddar实验表明，鱼藤酮0.05、0.5、1.0、10、50μg/mL处理SL-1和Sf9细胞2、12、24、36、48 h，只检测到坏死细胞DNA图谱典型症状，未能检测到明显的呈规则间隔180～200 bp断裂的特征性DNA片段化。上述形态学研究和DNA琼脂糖电泳检测结果表明，鱼藤酮以0.01-100μg/mL处理SL-1和Sf9细胞72h内对细胞以毒杀作用为主，未能观察到明显的细胞凋亡特征。
3.明确了鱼藤酮对细胞膜通透性的刺激作用。鱼藤酮以终浓度0.05、0.5、1.0、10、50μg/mL处理SL-1和Sf9细胞2、12、24、36、48h后，随着用药浓度的升高，时间的延长，乳酸脱氢酶从胞内漏出量逐渐增加。鱼藤酮0.05、1.0、50μg/mL，处理SL-1和Sf9细胞2、24、48h，PI和异硫氰酸荧光素钠标记右螺旋糖苷染色，采用流式细胞仪测定，荧光强度均显著增强，反映了细胞膜通透性显著增强，剂量依赖关系明显，说明鱼藤酮处理对细胞膜通透性的刺激作用。
4.研究了鱼藤酮处理对膜电位的影响。终浓度0.05、0.5、1.0、10、50μg/mL鱼藤酮处理SL-1和Sf9细胞2、12、24、36、48h后，采用流式细胞仪对鱼藤酮处理后两种细胞的细胞膜电位进行测定，结果表明鱼藤酮处理细胞后，细胞膜的膜电位逐渐降低，且随着药物浓度的升高处理时间的延长现象越明显。鱼藤酮处理两种细胞后对细胞线粒体膜电位产生影响，随着用药浓度的增大，时间的延长，线粒体膜电位逐渐下降。
5.测定了鱼藤酮处理对还原性谷胱甘肽(GSH)含量和总ATP酶(ATPase)活性变化的作用规律。鱼藤酮0.05、0.5、1.0、10、500μg/mL处理SL-1和Sf9细胞2、12、24、36、48h，胞内蛋白含量显著高于对照，且随着浓度升高和处理时间的延长而逐渐升高，同时胞内还原型GSH含量逐渐降低，总ATPase、Na+-K+-ATPase活性降低，表明细胞膜被破坏，并随着鱼藤酮浓度的升高，处理时间的延长破坏程度越大。
通过上述系列研究结果，显示鱼藤酮对SL-1和Sf9细胞均以毒杀作用为主，作用方式和现象基本相同；鱼藤酮均可作用于昆虫细胞膜，重者直接破坏细胞膜结构，轻者增强通透性，细胞膜电位下降，同时抑制总ATP酶的合成，细胞膜Na+、K+离子泵受到破坏，同时ATP酶含量下降，进一步使线粒体膜电位下降，抑制线粒体呼吸链正常功能。