沙门菌是一群寄生在人类和动物肠道中，经过粪口传播感染人体，当细菌被摄入后先侵入小肠末端位于派伊尔淋巴结的M细胞中并在其中生长繁殖。M细胞呈递抗原至巨噬细胞，沙门菌对巨噬细胞有很强的亲和性，可以诱导广泛的，持久的免疫反应。以沙门菌为载体制备的减毒疫苗能用于大规模的人群免疫，可以提高外源性抗原的免疫原性有较强侵袭力，稳定性好适合长时期治疗，另外菌体的来源途径广泛，成本低廉，减毒方法简单，经研究发现一种最好的方法就是利用沙门菌本身固有的一种高表达蛋白作为载体，如菌毛，鞭毛携带外源蛋白基因来构建疫苗。鞭毛在沙门菌菌体本身存在量比较小，存在细胞表面数量庞大的菌毛可以满足作为载体的要求，而且菌毛蛋白还可以诱导强的体液免疫和细胞免疫，而且介导粘附，容纳性好，外源片段的置换几乎不影响它的表达。编码菌毛蛋白表达基因agfA可以作为载体基因进行扩增克隆表达，所以，近年来越来越多的研究者开始用沙门菌的菌毛蛋白来携带外源的抗原基因，制作成重组疫苗。所以，制备agfA菌毛蛋白的多克隆抗体，用于检测以agfA为载体构建的重组疫苗显得非常重要。本研究将重点详细介绍该抗体的制备和检测方法。　　 本研究的目的主要是制备Agfa菌毛蛋白多克隆抗体检测以agfA为载体构建的重组疫苗表达的值和量。　　 方法：(一)、Agfa原核表达载体的构建及鉴定：(1)、引物设计策略和合成利用Gene Runner软件设计的引物，上游插入EcoRI酶切位点，下游插入HindⅢ酶切位点。(2)、以沙门菌ST14028-3b为模板扩增目的片段agfA基因，获得agfA基因扩增片段；利用质粒提取试剂盒提取质粒PET28a，40ul体系酶切质粒PET28a和agfA PCR产物，并且10ul体系4℃连接。同时制备化学感受态细胞DH5α、BL21，连接产物化学转化入DH5α、BL21感受态中，在37℃孵育箱中培养过夜；挑取平板上单个菌落在卡那抗性的液体LB培养基中培养，利用碱裂解法粗体质粒进行酶切鉴定，经鉴定成功的质粒测序鉴定；(二)、Agfa蛋白在原核细胞中的表达和鉴定：Agfa-His融合蛋白质的获得和鉴定：把转化成功菌株Agfa-PET28a-B121活化培养，利用IPTG进行诱导表达，利用western检测鉴定His标签蛋白；(三)、Agfa蛋白的提取和纯化：1)、诱鉴定成功的Agfa-His融合蛋白参照分子生物学方法进行提取，获得大量的粗提的蛋白；2)、粗提的蛋白利用其为His标签的蛋白可以和镍试剂结合的特性，进行手工重力纯化；(四)、免疫兔子：纯化成功的蛋白免疫新西兰白兔；(五)、Western、ELISA检测抗体的效价和特异性。　　 结果：1)经过PCR成功扩增出目的片段agfA，大约707bp；2)精提出纯度很高的质粒PET28a，并且连接agfA基因片段转化入菌株DH5α、BL21成功获得单克隆菌落，经酶切鉴定成功；3)通过测序结果显示目的片段连接克隆成功，命名agfA-PET28a；4)利用IPTG成功的诱导大量的Agfa蛋白质表达，手工重力纯化获得纯度较高的蛋白质；5)免疫三周，取血检测抗体，ELISA检测发现抗体的效价很高，Western结果显示能够成功检测Agfa-HIV重组疫苗。　　 结论：制备agfA多克隆抗体能够高效特异的检测以agfA为载体构建的重组疫苗疫苗。