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本文考察了饲粮VC添加对低温诱导条件下肉鸡生长性能、心脏指数、血常规、抗氧化能力、肺血管重构(Pulmonary vascular remodeling, PVR)和缺氧诱导因子-1α (Hypoxia inducible factor-1αa, HIF-1α)等缺氧相关基因表达的影响,在此基础上进一步探索了CoCl2模拟缺氧对肉鸡肺动脉平滑肌细胞(Pulmonary arteries smooth muscle cells, PASMC)中HIF-1α、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF)及血管内皮生长因子受体-2(Vascular endothelial growth factor receptor-2, VEGFR-2/Flk-1)基因表达水平的影响,为下一步继续探索VC缓解肉鸡腹水综合征(Ascites syndrome, AS)的分子机制奠定基础。因此,本论文包括两个试验。试验一：低温与饲粮VC添加对1-21d肉鸡机体抗氧化性能、HIF-1α基因表达及肺血管重构的影响选用400只1d科宝肉公鸡,按照初始体重无差异原则随机分为4个处理,处理1-4分别为低温组(Low ambient temperature, LAT)、低温+VC (1000mg/kg)组(LAT+VC)、常温组(Normal ambient temperature, NAT)、常温+VC (1000mg/kg)组(NAT+VC)。每个处理10个重复,每个重复10只鸡。试验期为21d=LAT组和LAT+VC组的饲养温度在试验第1-7d为24℃-26℃,第8-21d为9℃-11℃, NAT组和NAT+VC组的饲养温度在试验第1-7d为29℃-31℃,在试验第8-21d为24℃-26℃。结果表明：1)低温增加了试验全期的料肉比(Feed-to-gain ratio, F/G)(P<0.01),增加了21d肉鸡的心脏指数(P<0.05),以及14d肉鸡的红细胞压积(Hematocrit, HCT)和血红蛋白(Hemoglobin, HGB)水平(P<0.05)；饲粮VC的添加增加了21d肉鸡的HCT、HGB水平以及红细胞(Red blood cell, RBC)计数(P<0.05)。2)低温降低了21d肉鸡血清、肝脏和肺脏总抗氧化能力(Total antioxidant capacity, T-AOC) (P<0.05),增加了肉鸡血清和肝脏中VC含量、肝脏和肺脏中蛋白质羰基化水平以及肺脏丙二醛(Malondialdehyde, MDA)含量(P<0.05)；VC的添加有提高肉鸡血清T-AOC的趋势(P<0.1)。3)低温增加了21d肉鸡肺血管中膜面积与总管面积的比值(Vessel wall area to Vessel total area, WA/TA,%)和肺动脉平均中膜厚度占血管外径的比值(Mean media thickness in pulmonary arterioles, mMTPA,%)(P<0.05);饲粮VC的添加降低了肉鸡肺血管mMTPA(P<0.05),但对WA/TA的影响不显著。4)低温提高了21d肉鸡肺脏组织HIF-1α、VEGF及Flk-1mRNA的相对表达量(P<0.05),低温组添加VC后降低了肺脏组织HIF-1α、VEGF和Flk-1mRNA的相对表达量(P<0.05)。5)21d肉鸡肺脏组织中HIF-1α、VEGF和Flk-1 mRNA水平三者之间互为正相关(P<0.01)；VEGF mRNA的相对表达量与肺血管WA/WT和mMTPA值呈显著正相关(P<0.01)。以上结果提示,低温导致1-21d肉鸡机体发生氧化应激,诱发了21d肉鸡肺血管重构,提高了HIF-1α、VEGF和Flk-1基因表达,饲粮VC添加对21d肉鸡机体抗氧化能力提升不显著,但降低了HIF-1α、VEGF和Flk-1基因表达和血管重构。试验二：COCl2模拟缺氧对肉鸡肺动脉平滑肌细胞中HIF-1α, VEGF及Flk-1基因表达水平的影响本试验选用21d科宝肉公鸡,用组织块贴壁法进行肉鸡PASMC的原代培养。鸡只处死后取出肺动脉血管,剥离出中膜后剪碎成小组织块并放入培养瓶中贴壁,37℃、5%CO2培养箱中培养。通过α-actin免疫荧光染色法对细胞进行鉴定。对PASMC进行传代培养,通过添加CoCl2模拟细胞缺氧状态,CoCl2溶液浓度分别为100、200、250、500以及1000 μmol/L四种浓度,设置6、12、24、48h四个时间水平,每个时间点以不含CoCl2的阴性培养基做为对照组,相应时间点收集细胞,测定细胞HIF-1α mRNA相对表达量,同时测定处理48h时阴性对照组和CoCl2溶液浓度为250和1000μmol/L的细胞VEGF和Flk-1mRNA的相对表达量。用MTT法测定细胞增殖水平。试验结果：1)组织块贴壁5-6d后逐渐有细胞爬出,7-10d后细胞形成典型的“峰-谷”状。2)细胞免疫荧光显示,平滑肌细胞的细胞质中特有的肌动蛋白呈现出红色荧光。3)CoCl2处理时间及其浓度对PASMC中HIF-1α mRNA的相对表达有显著影响(P<0.05),其中用250、500和1000μmol/L浓度CoCl2处理12、24、48h后,PASMC的HIF-1α mRNA的相对表达均显著增加,其中以250μmoI/L CoCl2处理48h最高(P<0.01)。4)CoCl2处理时间对细胞增殖的影响显著(P<0.001),各浓度CoCl2处理的细胞随时间的增加细胞增殖增大,48h达到最大(P<0.01)。5)CoCl2浓度为250μmol/L和1000μmol/L下处理48h,细胞VEGF mRNA相对表达量均有高于COCl2浓度为0μmol/L的处理的趋势(P<0.1)：在CoCl2浓度250μmol/L和1000μmol/L下处理48h时,细胞Flk-1的表达量均高于CoCl2浓度为0μmol/L的处理,但差异不显著(P>0.05)。以上结果提示,用组织块贴壁法可以成功培养出肉鸡PASMC,用250μmol/L CoCl2溶液可以成功诱导细胞缺氧,并可在一定程度上提高细胞HIF-1α、VEGF和Flk-1基因的表达,在细胞水平上证明缺氧与HIF-1α,VEGF及F1k-1基因表达存在明显联系。