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大规模基因组测序表明,人类基因组中只有约2%的是编码蛋白质的基因,绝大多数的都是非编码转录产物(non-coding RNA,ncRNA)。Non-coding RNA根据分子链长度可进一步分为小于200nt的短链非编码RNA(small non-coding RNA,sncRNA)和大于200nt的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)。近年来大量的lncRNAs被发现报道,研究表明lncRNAs能参与调控机体的DNA损伤,DNA复制,细胞增殖,细胞分化,细胞凋亡等多种功能,众多生物学家认为lncRNAs具有丰富的生物学特性对于癌症发病机制研究和癌症治疗方案提供新的思路。 本文运用第三代单分子测序技术(single molecule sequencing,SMS),对DNA损伤诱导剂处理后的K562细胞系做 RNA测序,从而筛选出一种特殊的lncRNA。这是种位于基因间的超长非编码RNA(very long intergenic non-coding RNA,vlincRNA),普遍链长度超过50kb。已有文章表明,部分vlincRNAs的启动子位于长末端重复序列区间(LTR),这一部分包含有内源性逆转录病毒序列,这种具有LTR导向的vlincRNAs在胚胎干细胞和癌细胞中十分富集,已有实验证明用RNAi干扰技术沉默某些vlincRNAs能引起癌症细胞凋亡。 因此,本课题利用SMS和Genome Map等方法,对测序后的vlincRNAs表达数据结果反复筛选,筛选出Vlinc KVURN1,Vlinc KVDRN2,Vlinc KVURN3,Vlinc KVDRN4这四条比较有意义的vlincRNAs,并且这四条vlincRNAs都含有LTR-Promoter。多组实时定量PCR实验结果显示,药物处理K562细胞,这四种vlincRNAs在SN-38和Etoposide(VP-16)这两种拓扑异构酶抑制剂的影响效果最为明显,与测序结果完全一致。Gene Ontology(GO)注释结果表明,四条vlincRNAs的大多数功能与DNA损伤、核酸复制、细胞周期和细胞凋亡等细胞活动密切相关。