近半个世纪以来,肿瘤逐渐成为危害人类健康的主要疾病之一。导向治疗旨在特异性地杀伤肿瘤细胞并降低对正常细胞的毒副作用。与以往的手术,放疗等治疗肿瘤的方法相比,具有特异性高、副作用小等优点,因而受到广泛关注。传统的肿瘤导向治疗以单克隆抗体为导向载体,分别与药物、放射性同位素或生物毒素交联进行靶向治疗。但经临床治疗发现存在着药理学方面的问题。由于载体是大分子物质,通过血管内皮层以及穿透肿瘤外间隙受到限制,有相当数量积聚在肝、脾和骨髓,影响有效药物浓度聚集。因此导向载体的选择是决定肿瘤导向治疗效果最为关键的技术问题。随着噬菌体展示技术的提出和发展,探索出了一种新的筛选导向治疗所需载体的方法。噬菌体展示技术用于筛选肿瘤黏附肽具有多种优点:操作简便、有效;筛选得到的多肽能够与靶目标有特异性的高效结合;其分子量小容易穿过肿瘤的天然屏障、免疫原性低。 绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,简称GFP)作为新型的分子标记受到广泛地应用。其荧光性质比较特殊,在蓝光或紫外光的照射下就能激发荧光,不需要添加底物或共作用因子。另外,GFP的荧光也比较稳定,只有在过热,过酸和过碱的情况下蛋白才会变性。 本实验室通过噬菌体展示技术筛选出了一批能与肝癌细胞发生特异性结合的噬菌体肽,称为肝癌特异性黏附肽(liver cancer adhension peptide,简称LAP)。为了进一步验证黏附肽的导向性,将肽用GFP作为活体标记。期望筛选到的LAP在脱离噬菌体这个表达载体后依然具有肿瘤黏附特性。 本课题将A22、A54、A67、B3和B20五个噬菌体肽与GFP进行融合表达。其中A22、A54和A67为一级结构含有PSS或PTT。而B3的一级结构含有PS。B20是阴性对照,其一级结构不含有PS或PT的序列。通过PCR方法获得肝癌特异性黏附肽A22、A54、A67、B3和B20的基因。为了使融合表达时最大限度的保持