【摘 要】
：
目的：构建C57BL/6小鼠MHC-I分子真核表达质粒,转染293T细胞并鉴定其表达,为研究分子嵌合诱导移植免疫耐受奠定基础。方法：①采用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)
论文部分内容阅读
目的：构建C57BL/6小鼠MHC-I分子真核表达质粒,转染293T细胞并鉴定其表达,为研究分子嵌合诱导移植免疫耐受奠定基础。方法：①采用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)方法获取供体C57BL/6小鼠MHC-I基因H-2Db和H-2Kb。②通过双酶切、定向克隆技术将H-2Db和H-2Kb克隆入真核双表达质粒pIRES,构建重组质粒pIRES-H2Db-H2Kb。③使用Lipofectamine2000将重组质粒转染293T细胞,同时设置未转染组,转空质粒组。④荧光实时定量PCR检测转染后各组H-2Db和H-2Kb在mRNA水平表达情况。⑤流式细胞术检测转染后各组H-2Db和H-2Kb在蛋白水平表达情况。结果：①成功获取C57BL/6小鼠MHC-I分子H-2Db及H-2Kb的等位基因。②构建的C57BL/6小鼠MHC-I分子真核表达质粒经限制性双酶切鉴定成功正向插入pIRES质粒载体,经测序分析,克隆的基因与Genbank C57BL/6小鼠H-2Db和H-2Kb基因序列完全相同。③使用脂质体法成功将重组质粒pIRES-H2Db-H2Kb转染293T细胞。与未转染组和转染空质粒组相比,转染重组质粒组H-2Db和H-2Kb基因mRNA表达分别增加632倍和904倍,差异有统计学意义(P<0.01)。而未转染组与转染空质粒组之间差异无统计学意义(P>0.05)。④转染重组质粒组H-2Db和H-2Kb基因蛋白表达分别为(24.50±1.88)%和(34.30±2.68)%,明显高于转染空质粒组[H-2Db(0.42±0.05)%；H-2Kb(0.12±0.03)%]及未转染组[H-2Db(0.38±0.03)％；H-2Kb(0.10±0.02)％],差异具有统计学意义(P<0.01),而转染空质粒组和未转染组之间蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论：成功构建C57BL/6小鼠MHC-1分子真核双表达载体pIRES-H2Db-H2Kb,并实现其在293T细胞中的表达。
其他文献
“网络小说”随着科技和时代的发展开始活跃于文学论坛,对现代的青少年读者产生着巨大影响。近年来网络小说层出不穷,网络作家也犹如雨后春笋般脱颖而出。而被誉为“网络文学
在对外汉语写作课中,学生经常会出现词语搭配不当、语法错误、句型单一、语序错误等问题。针对这些问题,笔者将语块理论引入中级对外汉语写作课堂,以提高学生汉语表达的准确
随着中国经济的快速发展和国际影响力的不断增强,越来越多的外国人开始学习汉语,想要了解中国文化的外国人也逐渐增多。对外汉语教材是外国人学习汉语和了解中国文化的重要途
文章通过桓谭《新论》中的乐论思想分析,试图探究桓谭音乐思想与政治思想之间的关联,并对桓谭乐论思想的内在复杂性与人的精神根基之间的关系进行解读。桓谭以自然之理作为王
包刚升认为,国家治理概念的起源与公司治理有关,其核心是形成官员与公民共同体之间激励相容的合约。陈慧荣认为,应该基于国家与社会互动的视角来理解国家建设,国家要超越和渗
影视剧的翻译既是介绍异域文化的一种简洁直观的手段,又是传播本国本民族文化的一个重要途径。影视作品作为覆盖面最广阔的广播媒介,同时又兼有跨语言、跨文化、跨社会多重交
山体作为城市的特殊自然资源以及城市景观中重要的构成要素,大多做为城市的外围天际线与街区的标志、背景、象征或者独立地成为风景区。城市山体景观规划,对改善城市生态环境和城市景观品质都具有重要作用。我们应全力保护城市自然景观及其质量、维持城市景观的完整性。本文从生态修复角度出发,针对城市山体景观规划进行一系列研究和探索,并尝试利用该研究结论在济南佛慧山南入口景观规划项目中进行实践。本课题的意义是为生态修
<正>8月25日至26日,由北京市人民代表大会制度理论研究会秘书处与中共北京市委党校政治学教研部联合主办的第五届"民主与法治学术交流研讨会"在京召开,会议的主题是"新时代中
随着人类对流域水土地资源开发强度的不断扩大,流域人地关系地域系统及其演化逐步为国内外学者所关注。文章从资源环境和社会经济两个方面出发选择了与流域人地系统相关的40
在过去的100年里,全球共暴发四次流感病毒大流行,造成大量的人死亡。近几年,禽流感病毒如H7N9,造成散发的或小规模的人感染疫情,引起了极大的恐慌。此外,每年的季节性流感造