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鸭瘟病毒(DPV)能够引起鸭胚成纤维细胞(DEF)及淋巴细胞凋亡,围绕DPV诱导DEF凋亡通路及细胞周期等开展研究,获以下主要结果:1.DPV诱导DEF细胞周期及细胞凋亡与病毒复制关系研究(1)流式细胞仪检测DPV感染24h和36h的DEF细胞,结果显示G0/G1期细胞比例显著低照组,S期细胞比例显著高于对照组,导致细胞周期S期阻滞。(2)运用DAPI及流式细胞术检测DPV感染12h、24h、36h、48h和60h的DEF细胞显示,12h凋亡细胞较多,24h、36h及48h凋亡细胞减少;而RT-qPCR及TCID50检测对应时间点的病毒含量表明,病毒含量在48h达到峰值,60h逐渐下降。这表明DPV复制对于诱导DEF凋亡不成正比。2.宿主caspase家族蛋白在DPV诱导DEF细胞凋亡中的作用研究DPV感染12h、24h、36h、48h和60h的DEF细胞,用RT-qPCR对caspase-3、caspase-7、caspase-8和caspase-9的mRNA的水平检测结果表明,DPV感染细胞的mRNA含量是对照组的2倍以上;对caspase-3、caspase-8和caspase-9蛋白进行活性检测结果表明,在24h、36h、48h的caspase-8的活性显著高于对照组,在36h、48h、60h的caspase-9活性显著高于对照组。caspase-3、caspase-9特异性抑制剂及caspase蛋白家族广谱性抑制剂能够抑制DPV诱导细胞凋亡,而caspase-8特异性抑制剂不能抑制DPV诱导细胞凋亡。3.DPV通过线粒体、死亡受体和内质网通路诱导DEF细胞凋亡的研究DPV感染12h、24h、36h、48h和60h的DEF细胞:(1)JC-1荧光探针检测线粒体膜电位,结果是感染细胞荧光多于对照;ROS检测12h、24h、36h和48h感染细胞的红色荧光值分别是对照的1.28、1.36、1.18和1.06倍,ROS清除剂预处理的细胞内ROS可被清除而使线粒体膜电位升高,抑制凋亡;(2)RT-qPCR检测结果表明,线粒体通路相关基因(Bak、Cyt-c、Smac、PARP、Apaf-1、Bid、Bcl-2、XIAP和AIF),死亡受体通路相关基因(Fas、FasL、FADD和TRAIL),内质网通路相关基因(PERK、IRE1、Ca2+、CHOP、eiF2α和ATF4)的mRNA水平均是对照组的2倍以上。综上,DPV感染DEF细胞引起细胞周期S期阻滞,并且能够通过线粒体、死亡受体和内质网通路诱导细胞凋亡。