高压氧对新生大鼠缺氧缺血脑损伤后24h内脑细胞线粒体膜电势的影响

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目的:围产期缺氧缺血(hypoxic-ischemic, HI)是导致新生儿脑细胞损伤的主要原因之一。高压氧(hyperbaric oxygen, HBO)是临床上治疗缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)的方法之一,但其作用机制尚不完全明了。线粒体是所有细胞内制造能量的细胞器,线粒体膜电势(Mitochondiral Membrane Potential,△Ψm)是线粒体功能的标志,在HI损伤早期即发生变化。本研究的目的,是应用新生大鼠HIBD模型并模拟临床HBO治疗,通过观察HIBD损伤后24小时内脑皮质ΔΨm的变化,了解HBO对HIBD损伤后脑皮质细胞△Ψm的影响,探讨HBO是否是通过改善脑皮质细胞△Ψm和改善其线粒体功能而治疗HIBD。方法:将7日龄新生SD大鼠132只随机分为正常对照组,HIBD组及HIBD+HBO组(后两组按Rice法制作新生大鼠HIBD模型,大脑左侧为损伤侧),HBO+HIBD组动物在HI后立即给予HBO治疗,HBO结束的时间点记为0h点。动物按照处死时间点再分为0h,2h,4h,6h,12h,24h亚组(各组n=10)。各组动物断头处死后,制备脑皮质细胞悬液,给予ΔΨm标记物罗丹明123(Rodamine123, Rho123)孵育,用流式细胞仪检测Rho123的平均荧光强度(mean fluorescence level, MFL)、并以该MFL为△Ψm,分别记录各组左右侧大脑皮质ΔΨm绝对值和损伤侧/损伤对侧△Ψm比值。结果:1.正常对照组:左侧Ψm为(4.72±0.12)MFL,左侧/右侧△Ψm比值为(1.20±0.05)。2. HIBD组与正常组比较:HI后0h,2h,4h,6h,12h,24h各亚组左侧△Ψm均低于正常组,分别为(2.67±0.53)、(3.92±2.59)、(4.21±0.38)、(3.58±0.50)、(4.16±0.14)、(3.42±0.34)MFL,其中0h亚组与正常组比较差异具有统计学意义(P<0.05);HI后0h,2h,4h,6h,12h,24h各亚组左侧/右侧△Ψm比值均低于正常组,分别为(1.12±0.13)、(1.06±0.10)、(0.89±0.13)、(1.13±0.09)、(0.95±0.15)、(1.13±0.07),其中4h组与正常组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。HIBD后0h组、6h组、24h组与4h组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。3. HIBD+HBO组与正常组比较:HIBD+HBO后0h,2h,4h,6h,12h,24h各亚组左侧△甲m分别为(2.58士1.06)、(4.03±1.77)、(4.53±0.43)、(4.68±1.76)、(3.85±0.06)、(3.09±0.48)MFL。其中0h、24h亚组与正常组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。HIBD+HBO后4h、6h与O h差异具有统计学意义(P<0.05)。左侧/右侧△甲m比值分别为(0.94±0.40)、(0.92±0.15)、(1.13±0.05)、(1.06±0.14)、(1.08±0.08)、(1.03±0.16)。其中0h、2h组左侧/右侧△Ψm比值与正常组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。4. HIBD组与HIBD+HBO组比较:HI后4h,6h,12h,24h时间点的左侧△Ψm值,两组之间差异具有统计学意义(P<0.05),但各时间点的左侧/右侧△甲m比值,两组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.HI可导致新生SD大鼠损伤侧脑皮质细胞△甲m以及损伤侧/损伤对侧△甲m比值的降低;2.HI后立即给予单次HBO治疗可部分缓解HI后24h内损伤侧脑皮质细胞△Ψm的降低程度,但对损伤侧/损伤对侧△甲m比值的变化无明显影响;3.HBO是否可通过改变损伤侧脑皮质细胞ΔΨm这一机制在短期内达到对HIBD的治疗作用,目前尚无法确定。
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