胚胎干细胞(ES细胞)是从动物早期胚胎的内细胞团或原始生殖细胞分离出来的具有发育全能性的一种未分化的无限增殖细胞系。本论文的目的是研究胚盘细胞的分离方法和探索影响鸡胚胎干细胞离体培养的各种因素,进一步优化CES细胞分离方法和离体培养体系,为CES细胞体外长期培养和建系提供实验依据,并对离体培养的CES细胞进行定向诱导分化为脂肪细胞的研究。　　 通过药勺法、发环法、纸环法以及发环+纸环法来分离胚盘,结果表明:发环+纸环法与其它3种方法比较,在分离胚盘时操作简便、节省时间,且易得到完整的胚盘,获得的完整胚盘率为75％～85%。研究比较了胚盘不同区域细胞对CES细胞阳性克隆率的影响,结果表明,将胚盘明、暗区分开培养,明区分离培养得到的CES细胞阳性克隆率明显高于明区+暗区。在鸡的X期胚盘细胞原代培养过程中,使用胰酶所获得的CES细胞阳性克隆率小于只用机械吹打法获得的CES细胞阳性克隆率。　　 用鸡胚成纤维细胞(CEF)、小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)和STO细胞制备饲养层培养CES细胞,结果显示:三种细胞作饲养层均可支持CES细胞生长,其中以MEF细胞制作的饲养层所获得的CES细胞阳性克隆率最高,在传代过程中CES细胞的成活率也明显高于其它两种饲养层细胞,但与STO细胞差异不显著。　　 BRL-CM+饲养层作为培养体系,可将CES细胞传至7代;而BRL-CM+饲养层+细胞因子作为培养体系,可将CES细胞传至25代,表明后一种培养体系优于前一种。收集1～3d、4～6d、7～9d、1～9d以及10～12d的条件培养基,并培养胚盘细胞,结果表明:1～3d组培养获得的细胞克隆数最多,10～12d组的细胞克隆数显著低于前4组。　　 本研究比较了挑克隆法、全消化法以及PBS+挑克隆法对CES细胞传代的影响,结果表明:PBS+挑克隆法传代效果最好,但与挑克隆法差异不显著。　　 设置2、5、8以及11min等时间对CES细胞进行消化,结果显示:消化11min的细胞形成的克隆,从第4代开始极显著低于其他消化时间,而在第4代时,消化2和5min的细胞形成的克隆数高于消化8和11min的细胞。　　 不同浓度的血清用来冻存CES细胞,并尝试使用了50%CES-条件培养基,结果表明:冻存液中血清浓度为40%时,CES细胞的复苏成活率最高;复苏CES细胞时,使用50%CES-条件培养基相比于新鲜CES培养基,细胞的复苏状态更好。　　 培养传至第4代的CES细胞经AKP染色后呈深蓝色,而饲养层不着色;免疫荧光染色,可见CES细胞呈绿色荧光;表明CES细胞保持干细胞未分化的特性。　　 采用地塞米松、胰岛素和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)等联合作用,可将CES细胞定向诱导分化为为脂肪细胞。诱导21d后,油红O染色鉴定可见细胞中有橙红色脂滴。