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目的:肿瘤的发生始于细胞增殖异常,而细胞增殖异常由细胞周期异常引起,因此DNA精确复制和细胞正常分化的调控机制对肿瘤的发生尤为关键。细胞周期的调控机制复杂,有多种基因和蛋白参与,其中微小染色体维持蛋白（MCM）是重要的DNA复制启动因子,是所有真核细胞DNA复制所必须的。MCM家族蛋白中共6个成员,分别为MCM2-7。MCM2作为其家族中的一员,在静止期细胞中MCM2含量极少,在增殖、转化的细胞中,MCM2的含量在G0期开始增加,G0末期和S早期达到高峰,并与染色质结合,在S期至M期是游离的MCM2,G2期与M期时降低。由于这种与细胞增殖过程相一致的周期性变化,目前已将它视为S期细胞的标志物,且被认为是癌前标志物。前期研究发现MCM2蛋白的磷酸化位点Ser139在淋巴道高低转移肿瘤细胞中有显著差异,并且初步说明MCM2的磷酸化位点Ser139在卵巢癌转移中发挥作用。然而,MCM2作为肿瘤细胞增殖的标志物,MCM2的磷酸化位点Ser139在肿瘤增殖的生物学功能尚未完全发现。在本研究中,我们旨在探索MCM2的磷酸化位点Ser139在卵巢癌增殖中的作用以及对其分子机制进行初步研究。方法:1.用数据库预测MCM2在卵巢癌癌组织和癌旁组织的表达差异及高低表达MCM2与卵巢癌患者无进展生存率的关系。2.为了研究MCM2在卵巢癌细胞中的作用,利用瞬时转染技术,将空载体pc DNA3.1,pc DNA3.1-MCM2和pc DNA3.1-MCM2-S139A转入卵巢癌HO8910PM细胞中,a.用EDU-488细胞增殖检测实验检测MCM2位点S139磷酸化后,增殖细胞数量的变化。b.用平板克隆实验检测MCM2位点S139磷酸化后,细胞克隆形成能力的变化。c.流式细胞术检测MCM2位点S139磷酸化后,卵巢癌细胞周期的变化。d.用Western Blotting法检测MCM2位点S139磷酸化后,细胞周期相关蛋白的变化。3.用Western Blotting法检测MCM2位点S139磷酸化后,增殖相关信号通路的变化。4.AKT抑制剂MYE354处理细胞后,a.EDU-488细胞增殖检测实验检测MCM2位点S139磷酸化后,增殖细胞数量的变化。b.平板克隆实验检测MCM2位点S139磷酸化后,细胞克隆形成能力的变化。c.流式细胞术检测MCM2位点S139磷酸化后,卵巢癌细胞周期的变化。5.AKT抑制剂MYE354处理细胞后,Western Blotting法检测MCM2位点S139磷酸化后对AKT通路相关关键蛋白的影响;ERK抑制剂U0126-Et OH处理细胞后,Western Blotting法检测MCM2位点S139磷酸化后对ERK通路相关关键蛋白的影响。结果:1.数据库结果显示,MCM2在卵巢癌癌组织表达较高,在癌旁组织表达较低,两者有明显差异,并具有统计学意义;高表达MCM2的卵巢癌患者与低表达MCM2的卵巢癌患者的无进展生存率存在差异,并具有统计学意义。2.EDU-488细胞增殖检测实验结果显示,高表达MCM2后,增殖细胞数量增加,而高表达MCM2-S139A组位点突变后,与前者相比增殖细胞数量减少;与高表达MCM2组相比,AKT抑制剂MYE-354处理过的MCM2组增殖细胞数量减少。3.平板克隆实验结果显示,高表达MCM2后,细胞克隆形成数目增多,克隆团大小增加,而高表达MCM2-S139A组位点突变后,与前者相比细胞克隆形成数目减少,克隆团大小也减小;与高表达MCM2组相比,AKT抑制剂MYE-354处理过的MCM2组细胞克隆形成数目减少,克隆团大小也减小。4.流式细胞周期实验显示,高表达MCM2后,细胞在G0/G1期细胞所占比例降低,S期细胞比例增高,G2/M期细胞比例无显著改变,而高表达MCM2-S139A组位点突变后,与前者相比细胞在G0/G1期细胞所占比例增加,S期细胞比例减少;与高表达MCM2组相比,AKT抑制剂MYE-354处理过的MCM2组细胞在G0/G1期细胞所占比例增加,S期细胞比例减少。5.Western Blotting结果显示,过表达MCM2后,PI3K,p-AKT（Ser473）,p-ERK（Thr202/Tyr204）和CDK6表达上调,P53,P21 cip1,P27 kip1,Wee1和Myt1表达下调;MCM2蛋白磷酸化位点S139突变后,PI3K,p-AKT（Ser473）,p-ERK（Thr202/Tyr204）和CDK6表达下调,P53,P21 cip1,P27 kip1,Wee1和Myt1表达上调;与高表达MCM2组相比,AKT抑制剂MYE-354处理过的MCM2组p-AKT（Ser473）表达下调,P53,P21 cip1表达上调;与高表达MCM2组相比,ERK抑制剂U0126-Et OH处理过的MCM2组p-ERK（Thr202/Tyr204）和p-AKT（Ser473）表达下调。结论:我们发现MCM2磷酸化位点S139促进卵巢癌细胞增殖,可能通过PI3K-AKT信号通路参与调控此生物学行为。