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目的：利用SIK2敲低细胞系，研究SIK2敲低对细胞DNA辐射损伤修复能力的影响，推测SIK2在辐射损伤修复中的作用。分别在细胞水平和体外检测 SIK2与DNA-PKcs之间的相互作用，进一步明确其相互作用与细胞周期的关系及相互作用的区域。 方法：将HeLa-shNC细胞和HeLa-shSIK2细胞经4Gyγ射线照射，利用彗星电泳检测其相应时间点的尾矩，以此判断它们DNA辐射损伤修复能力的差异，并推测SIK2在DNA损伤修复中的作用。利用TdR双阻断法将HeLa细胞同步于G1/S期，然后释放出来，应用流式细胞术和细胞免疫共沉淀技术，分别检测SIK2和DNA-PKcs蛋白在S期（释放后2h）、G2/M期（释放后9h）和G1期（释放后12h）相互作用的强弱，以此推测二者相互作用的细胞周期时相相关性。设计SIK2及其截短体引物，运用PCR方法分别扩增SIK2、SIK2-Δ1（280~926）、SIK2-Δ2（400~926）、SIK2-Δ3（1~400）、SIK2-Δ4（700~926）五个基因片段，将目的片段插入原核表达载体pGEX-4T-2中，构建GST标签的重组质粒。将构建的重组质粒转化到大肠杆菌BL21中，用IPTG诱导SIK2、SIK2-Δ1、SIK2-Δ2、SIK2-Δ3、SIK2-Δ4和GST空载的原核表达，用考马斯亮蓝染色和Western blot进行鉴定。用诱导表达成功的GST-SIK2、GST-SIK2-Δ1、GST-SIK2-Δ2、GST-SIK2-Δ4蛋白与内源性DNA-PKcs蛋白行GST pull-down实验，检测SIK2蛋白与DNA-PKcs蛋白在体外的相互作用及相互作用区域。 结果：1.彗星电泳显示，HeLa-shSIK2的尾矩在照射完1h和2h较HeLa-shNC长，说明SIK2敲低后，细胞对于辐射诱发DNA损伤的修复能力降低，SIK2可能参与辐射诱发的DNA损伤修复。2.用TdR双阻断法分别使细胞同步化于S期、G2/M期和G1期，用免疫共沉淀技术分别检测二者在这三个时期的相互作用，结果发现，二者在整个细胞周期都有作用，其中G2/M期和G1期形成的蛋白复合物较多，提示它们可能主要在G2/M期和G1期相互作用。3.成功构建了SIK2及其截短体的原核表达重组体，并用IPTG诱导表达，用考马斯亮蓝染色及 Western blot鉴定显示，GST-SIK1~926、GST-SIK280~926、GST-SIK400~926、GST-SIK1~400、GST-SIK700~926和GST分别位于130KD、110KD、84KD、72KD、54KD和26KD左右，均与预期分子量大小相符。4.用GST pull-down检测SIK2蛋白与DNA-PKcs蛋白的体外相互作用时发现，GST-SIK1~926、GST-SIK280~926和GST-SIK400~926在体外能与DNA-PKcs相结合，而GST-SIK700~926在体外不能结合DNA-PKcs，由此推测，在体外能与DNA-PKcs结合的区域位于SIK2的PKA结合结构域。 结论：1.SIK2敲低后，导致细胞的DNA辐射损伤修复能力减弱，表明 SIK2可能参与辐射诱发的DNA辐射损伤修复。2.在细胞中，SIK2能与DNA-PKcs发生相互作用，它们发生相互作用的细胞周期时相主要为G2/M期和G1期。3.构建了SIK2及其截短体的原核表达重组体，并成功地在大肠杆菌中诱导表达。4.在体外，SIK2能与DNA-PKcs相结合，结合位点位于SIK2的PKA结合结构域。