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瘦素(Leptin)是16kDa的多功能蛋白。近来的研究表明,Leptin在胚胎植入及胎盘发生过程中起着重要作用,参与母胎对话和滋养层细胞的侵润。尽管如此,Leptin在小鼠囊胚植入过程中的作用并未完全阐明。本研究对Leptin在小鼠胚胎植入中的作用机制作进一步的探讨。在动情周期和围植入期小鼠子宫,检测到Leptin及其受体亚型mRNA的表达,免疫荧光分析验证了Leptin受体蛋白表达于子宫。围植入期Leptin及受体的差异表达说明Leptin可能参与囊胚植入过程。在分析胚胎植入机理的体外培养模型中,Leptin促进囊胚在纤连蛋白上的粘附和扩展,300ng/mlLeptin处理的囊胚粘附率最高,为76.58±6.41%(P=0.046),30ng/mlLeptin处理的囊胚扩展率最高,达78.64±8.48%(P=0.005)。Leptin促进分离培养的原代小鼠子宫内膜上皮细胞粘附于纤连蛋白,层粘连蛋白和Ⅳ型胶原,显示出剂量和时间依赖效应;并且,Leptin能上调子宫内膜上皮细胞alphav和beta3整合素的表达。以上实验说明Leptin诱导小鼠囊胚的植入。
钙周期素结合蛋白(Calcyclin-BindingProtein/CacyBP)是参与连环蛋白(beta-catenin)降解的一个钙信号蛋白,目前对其功能知之甚少,尚未有CacyBP参与生殖调节的报道。本研究旨在阐明该分子在小鼠子宫的时空表达模式及调节,并对其调控正常子宫内膜事件的作用进行了探讨。研究结果表明,CacyBP主要定位于子宫腔上皮和腺上皮,在动情周期和妊娠早期均呈动态表达。妊娠1-4天,CacyBP呈低表达,妊娠5-7天腔上皮和腺上皮以及蜕膜表达增强,并在第7天胚胎滋养层表达尤为显著。利用去卵巢小鼠和假孕小鼠实验发现,孕酮和雌二醇上调CacyBP的表达,孕酮和雌二醇的上调作用能分别被Ru486和Tamoxifen抑制。CacyBP反义核酸能显著抑制紫外照射诱导的基质细胞凋亡,并且宫角注射反义核酸显著降低小鼠胚胎着床。总之,该实验表明,妊娠早期CacyBP在孕酮和雌二醇的正向调控下,参与子宫内膜细胞凋亡的调节,从而在妊娠建立等子宫内膜事件中起着重要作用。
鉴于CacyBP在小鼠子宫内膜上皮细胞表达以及在滋养层细胞上高表达,进而选用人绒膜癌细胞JEG3和人宫颈癌细胞HeLa作为体外研究模型,以探讨CacyBP基因的功能。研究结果表明,CacyBP在细胞周期中呈动态表达,有丝分裂前期及分裂中期暂时性升高,有丝分裂后期快速下降,而beta-catenin在有丝分裂整个时相均呈高表达。在JEG3细胞上过表达人CacyBP基因(hCacyBP基因)导致G1期细胞增多,而转染载体pcDNA3.1却无这种作用。并且过表达hCacyBP基因干扰了细胞增殖。因而本研究指出CacyBP以细胞周期依赖方式受到严格的调节,并且过表达hCacyBP影响细胞周期进程,促进Gl期阻滞,从而抑制细胞增殖。