CD9是一种膜蛋白，参与细胞黏附、迁移、增殖和分化等过程。哺乳动物受精过程中，精卵结合和融合是重要环节，CD9在此过程中发挥重要作用。随着体外受精-胚胎移植和冷冻技术的发展，冷冻技术在动物种质资源的保存上得以推广应用。虽然卵母细胞的冷冻方法在不断发展，但是由于冷冻后受到一定的损伤，对其后期发育产生一定的影响。可是，冷冻卵母细胞在体外胚胎生产技术的研究中显得尤为凸显。卵母细胞的冷冻保存要比胚胎冷冻保存应用前景更为广泛，可以利用冷冻技术建立卵子库，这样不仅可以解决目前卵母细胞短缺问题，还可以使其他生物技术不受时间和空间的限制。本研究探讨了不同发育期卵母细胞冷冻前后CD9表达量变化对精卵结合融合的影响。研究分为3个实验，获得如下结果：1.冷冻对牛卵母细胞体外成熟的影响。本研究采用玻璃化冷冻法对GV期和MII期卵母细胞进行冷冻保存，结果表明，冷冻后GV期和MII期卵母细胞的形态正常率分别为51%和66%，与对照组92%和90%相比差异极显著（P<0.01）。冷冻后GV期成熟率为43%，与对照组90%相比差异极显著（P<0.01），说明冷冻保存对卵母细胞有一定的损伤，影响其后续发育能力。2.冷冻对卵母细胞CD9表达影响。采用免疫荧光法，对CD9在GV期和MII期牛卵母细胞冷冻前后表达进行定位分析，结果显示，CD9在GV期和MII期牛卵母细胞冷冻前后均有表达。再用免疫印迹法，检测CD9在GV期和MII期牛卵母细胞冷冻前后的表达量，结果显示，均检测到24kD的CD9蛋白。进一步灰度分析的结果显示，在鲜MII期卵母细胞CD9表达量最高，其次为冷冻MII期卵母细胞，GV期冷冻卵母细胞表达量最低。说明冷冻保存影响CD9的表达，而且CD9表达量随卵母细胞发育成熟而增加。3.CD9抗体及玻璃化冷冻保存对精卵结合和融合的影响。用CD9单克隆抗体处理成熟卵母细胞，统计分析精子结合卵子数和精子穿卵率发现，实验组（每卵粘附数2.2±0.4，穿卵率26%）明显低于对照组（每卵粘附数6.0±0.3，穿卵率88%），差异极显著（P<0.01），并且呈剂量依赖性，说明卵母细胞膜蛋白CD9参与精卵结合和融合。GV期冷冻-解冻卵母细胞成熟后IVF结果显示，实验组（每卵粘附数3.0±0.3，穿卵率40%）明显低于对照组（每卵粘附数6.0±0.3，穿卵率88%），差异极显著（P<0.01）。MII期冷冻-解冻卵母细胞IVF结果显示，实验组（每卵粘附数3.2±0.4，穿卵率52%）明显低于对照组（粘附数6.0±0.3，穿卵率88%），差异极显著（P<0.01）。试验结果表明，玻璃化冷冻保存卵母细胞不但影响其CD9表达，而且对其早期发育阶段损伤程度更为严重。